脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析 - 重庆医学.pdf

重庆医学 年 月第 卷第 期 论 著 脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析 李健春 王 丽 姜 宁 王 琼 西南医科大学药学院四川泸州 中西医结合防治器官纤维化实验室中西医结合 研究中心西南医科大学附属中医医院四川泸州 摘要 目的 构建含有脑源性神经营养因子 的原核表达质粒 及相应的原核表达菌经异丙基 硫代半乳糖苷 诱导表达后研究其生物学活性方法 按照大肠杆菌 的密码子偏好性进行密码子优化人工 合成大鼠 的基因序列并构建原核表达质粒 经限制性内切酶 酶切鉴定及 测 序鉴定后导入大肠杆菌 经 诱导表达后用 检测重组蛋白的表达情况以 特异性抗体采用 法鉴定 蛋白抗原性四甲基偶氮唑蓝 法检测 蛋白对 细胞活力的影响结果 构建的 经双酶切和测序鉴定与设计序列 一致工程菌经 诱导后在相对分子质量 左右有 条明 显蛋白条带 显示目的蛋白能够与特异性 抗体反应不同浓度 蛋白处理组与对照组比较细胞活力均有 不同程度的增加其中 处理组效果最优结论 成功构建原核表达质粒 及相应的原核表达 菌该工程菌表达的蛋白具有良好的生物