不同基质对木霉菌产几丁质酶活性探讨.ppt

第三組 B9732076 邱品學(乙) B9732080 詹筑茵(乙) B9732082 陳亭仰(乙) B9732102 林明縈(乙) 指導老師:林世彬、陳莉臻老師 大綱 木黴菌Trichoderma spp. 幾丁質 幾丁質酶 不同碳源對酶活性的影響 不同氮源對酶活性的影響 不同培養時間對產酶效果的影響 不同初始pH對產酶效果的影響 不同培養溫度對產酶效果的影響 木黴菌Trichoderma spp. 木黴菌是屬於絲狀真菌類，對於土媒性真菌，如鐮刀病菌、腐霉病菌、白絹病菌及立枯絲核菌等病原菌具有拮抗作用，能部份取代化學性的殺真菌劑，而減少對環境的衝擊，故常應用於生物防治上。 (Benitez et al, 2004) 木黴菌Trichoderma spp.分類 無性世代 有性世代 門 不完全菌門 子囊菌門 綱 絲孢綱 核菌綱 目 叢梗孢目 肉座菌目 屬 木黴菌屬 肉座菌屬 .tw/files/popsc/2005_79/34-39.pdf 在掃描式電子顯微鏡下，一種木黴菌的外觀。 .tw/files/popsc/2005_79/34-39.pdf 幾丁質(chitin) 幾丁質在自然界的分布廣泛，諸如蝦蟹殼等水生甲殼類的外殼、昆蟲、真菌的細胞壁中皆有豐富的含量。幾丁質是含氮高分子的聚合物，它是由1000至3000個N-乙醯葡萄糖胺以β-1,4鍵結構成的天然多醣類。 (Busam，1997；Clendennen，1997) 幾丁質經去乙醯反應後產生之去乙醯產物稱為幾丁聚醣，其可應用在食品、農業、化妝品、紡織、生物技術，環保等產品。 幾丁質的相關製品中以幾丁寡醣最具保健食品及醫藥上的價值。 N-乙醯幾丁寡醣及幾丁寡醣的製備常用化學法或酵素法。 (Bolar，2001) 化學法多使用大量的酸水解幾丁質生成幾丁寡醣。 酵素法則利用幾丁質酵素(chitinase)及幾丁聚醣酵素水解幾丁質及幾丁聚醣，酵素法具有高專一性，但酵素價格昂貴為其缺點。 (Koga，1999) 幾丁質酶(chitinase) 幾丁質酶的分子量約在19至110 kDa之間，在細菌與真菌中多為30-120 kDa。 大多數微生物的幾丁質酶作用最適pH值在4-6之間，酶穩定的pH範圍一般在4-11之間 作用的最適温度多為50-60℃，温度過高，酶活力容易喪失。 (Koga，1999) 目前研究和利用幾丁質酶降解幾丁質從而進行病蟲害防治、醫藥生產、飼料加工一直是人們關注的課題。 (Koga，1999) 注:1:1%麩皮+1%澱粉；2: 1%麩皮+1%乳糖；3: 1%麩皮+1%麥芽糖；4: 1%麩皮+1% 蔗糖；5: 1%麩皮+1%CMC-Na；6: 1%麩皮+1%葡萄糖；7: 1%麩皮+1%果糖；8: 1% 麩皮+1%木糖；9: 1%麩皮+1%濾紙。 圖一、不同碳源對酶活性的影響 (Agricultural Sciences，2010) 圖二、不同碳源比例對酶活性的影響 注:1：1%濾紙+1%麩皮；2：1%濾紙+2%麩皮；3：1%濾紙+3%麩皮；4：1%濾紙+4%麩皮 ；5：2%濾紙+1%麩皮；6：3%濾紙+1%麩皮；7：4%濾紙+1%麩皮 (Agricultural Sciences，2010) 1:硝酸銨；2:硝酸鉀；3:硫酸銨；4:尿素；5:蛋白腖；6:明膠；7:酵母析出液 圖三、不同氮源對酶活性的影響 (Agricultural Sciences，2010) 圖四、不同蛋白腖濃度對酶活性的影響 (Agricultural Sciences，2010) 蛋白腖濃度 圖五、不同培養時間對產酶效果的影響 (李等，2008) 濾紙酶FPA 纖維素酶CMC 時間 圖六、不同初始pH對產酶效果的影響 (李等，2008) 濾紙酶FPA 纖維素酶CMC 圖七、 不同培養溫度對產酶效果的影響 (李等，2008) 濾紙酶FPA 纖維素酶CMC 結論 碳源為麩皮與濾紙的組合，且比例為1%:2%時、CMCase與FPase有較高的酶活力 以蛋白腖時為最適氮源 蛋白腖濃度為0.5%時最佳 培養時間為3-4天產酶能力強 液體培養基起始pH在4-6的條件下產酶活性最旺盛 培養溫度在26-30℃具有最高的酶活力 參考文獻 .tw/files/popsc/2005_79/34-39.pdf Benitez, T., A. M. Rincon, and A. C. Codon. (2004) , Biocontrol mechanism of Trichoderma strai