α烯醇化酶靶向rna干扰对原代培养乳鼠心肌细胞 - 中华高血压杂志.pdf

中华高血压杂志 年 月第 卷第 期 ， ， · · ２００８ １ １６ １ ＣｈｉｎＪＨ ｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｊａｎ２００８ Ｖｏｌ．１６Ｎｏ１ ４１ 　 ｙｐ ·论著 · α烯醇化酶靶向ＲＮＡ干扰对原代培养 乳鼠心肌细胞能量代谢及收缩功能的影响 １ １ ２ １ １ 朱理安 ，方宁远 ，高平进 ，金贤 ，汪海娅 摘要】 目的 采用ＲＮＡ干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞 烯醇化酶的表达，探讨 烯醇化酶对心肌细胞能 　　 　 　 α α 量产生和收缩功能的影响。方法 针对 烯醇化酶基因，化学合成 对小片段干扰 （ ）（分别为针对 烯 　 α ３ ＲＮＡ ｓｉＲＮＡ α 醇化酶 位点的序列 ，针对 烯醇化酶 位点的序列 及针对 烯醇化酶 ｍＲＮＡ４０６ ４２５ １ ｍＲＮＡ６５６ ６７５ ２ ｍＲＮＡ ～ α ～ α 位点的序列 ）并转染原代培养的 大鼠心肌细胞。采用 和 技术分 ７５４ ７７３ ３ ＷＫＹ ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ～ 别在 和蛋白水平检测 烯醇化酶的表达情况，筛选其中沉默效应最好的序列（序列 ）转染心肌细胞，即 ｍＲＮＡ α １ ＲＮＡ干扰实验组，以未转染 ｓｉＲＮＡ的心肌细胞为对照组，荧光素荧光素酶法检测细胞 ＡＴＰ水平，视频跟踪计算机 测定系统测定细胞收缩反应，参数包括最大收缩幅度（ ），最大收缩速度（ ／ ）。结果 针对 烯醇化酶 ｄＬ ｄＬｄｔ 　 α ｍＲ ｍａｘ 位点的 显著下调 烯醇化酶 和蛋白的表达，并且呈剂量和时间依赖关系， ／ ＮＡ４０６ ４２５ ｓｉＲＮＡ ｍＲＮＡ ２００ｎｍｏｌＬ ～ α 可达到最大沉默效应，其下调 烯醇化酶 和蛋白表达的最大效应分别出现在转染后 和 。 烯醇化 α ｍＲＮＡ ２４ｈ ４８ｈ α 酶沉默后细胞 产生减少（ －７ ／ 蛋白）， ［（ ） ］和