染色体c-显带技术.ppt

实验十 染色体C-显带技术 一、实验目的 二、实验原理 1、染色体分（显）带：是指染色体标本经过某些化学因素，如酸通过一种或几种显带技术处理，使染色体上呈现染色深浅不同、明暗相间的条纹。。 二、实验原理 1、染色体分（显）带：是指染色体标本经过某些化学因素，如酸、硷、盐、酶或物理因素，如温度等处理，再经染色后，在染色体纵向结构的特定部位上显示出染色深浅不同、明暗相间的带纹。带型具有染色体、种、属的特异性。 2、常见的染色体显带技术：G显 带（Giemsa）、C显带(centromere)、 Q显带(quinacrine)、R显带(reverse) 、N显带(nucleolus organizer region) 技术等。 3、 C显带技术：C带又称着丝粒异 染色质带(Centromere heterochromatin)，或组成异染色质带 (constitutive heterochromatin)。 （1）染色体标本经一定浓度的酸 、碱处理后，在缓冲盐溶液中热水解， 再以Giemsa染液染色。 （2）经此法处理后显示的带型是 ：常染色质部位染色较浅，而结构异 染色质部位染色较深。 （3）人和动物染色体中，C带的 位置一般在着丝粒或其附近的次缢痕 及染色体的长臂远端处。而在植物中C 带分布较广，染色体末端、中部、着 丝粒两侧、次缢痕部位，都可能出现 。在植物中应用广、准确性重复性低。 （4） C显带的方法： a、BSG法: Ba(OH)2 2ⅩSSC Giemsa b、酶处理：胰蛋白酶 c、变性剂处理：尿素法等 4、G显带技术： （1）概念：染色体标本在染色前的处理比较温和，经Giemsa染色后，在染色体的全部长度上显示出丰富的带纹（1971，Sumner）。 （2）方法：几种， T-G法 (trypsin)-胰酶法 三、实验材料、器具和药品 1、材料：小鼠染色体标本 2、用具和药品： 染色缸、 水浴锅、染色板、5%Giemsa染液、饱和Ba(OH)2 溶液、0.2M HCl 、 2×SSC 、0.1MHCl 四、实验步骤 1、将片龄为一周左右的染色体标本放在染色缸中，倒入0.2MHCl 处理60分钟。 2、倒去0.2MHCl，蒸馏水冲洗2次，直接注入50oC饱和Ba(OH)2溶液，在50oC 水浴中处理10-15分钟。 3、用水置换Ba(OH)2溶液或用0.1MHCl清洗一下，洗去Ba（OH）2钡膜，然后用蒸馏水冲洗2次。 4、倒入2×SSC溶液，在 60oC的水浴中处理50分钟。 5、倒去2×SSC溶液，蒸馏水冲洗，晾干。 6、染色：5%Giemsa染液染色30 分钟。 7、显微镜下观察染色体上的C-带。 五、作业： 绘制作出良好的小鼠中期染色体C带示意，并图示C带。 染色体的核型、组型和显带 核型（karyotype）：一个体细胞全部中期染色体的图像；根据染色体的结构特征，可以把染色体分为若干组。 组型：核型的模式图。 显带：用不同的染料处理染色体显示的带型，每一个染色体都有特定的带型。 * * 1、掌握染色体C-显带技术； 2、了解C-显带法分析染色体的 方法。 小白鼠C带中期分裂相 小白鼠C带中期分裂相 田鼠G带中期分裂相 小白鼠G带中期分裂相