壳聚糖固定化乙醇脱氢酶的酶学性质研究 - 上海师范大学学报.pdf

第 卷第 期 上海师范大学学报 自然科学版 年 月 壳聚糖固定化乙醇脱氢酶的酶学性质研究 李 雪 张彩艳 童凯琛 马中良 上海大学 生命科学学院上海 摘要 以壳聚糖作载体戊二醛作交联剂并以游离的乙醇脱氢酶作为对照对壳聚糖固定 化乙醇脱氢酶的酶学性质进行研究结果表明当戊二醛浓度为 交联时间为 时壳聚糖固定化乙醇脱氢酶对温度碱性环境以及金属离子 溶液的耐受性均明显增强 且操作稳定性明显提高 关键词 壳聚糖 乙醇脱氢酶 固定化酶 中图分类号 文献标志码 文章编号 几丁质 是自然界中仅次于纤维素的第二大类天然高分子化合物是地球上存量极为丰富的 一种自然资源 壳聚糖 几丁质的脱乙酰基产物由 乙酰胺基 葡 萄糖单元和 氨基葡萄糖单元组成属多糖类物质是天然多糖中少见的带正电荷 的高分子物质其在材料工业农业医药食品化妆品以及环保等诸多方面具有广泛的用途 乙醇脱氢酶大量存在于人类和动物肝脏微生物细胞及植物组织内 是广泛专一性的含锌金属酶以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 为辅 酶催化生物体内伯醇的氧化和醛的还原乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶 共同构成乙醇脱氢酶系参与体内乙醇代谢是人和动物体内重要的代谢酶 固定化酶 是 世纪 年代发展起来的一种新技术将水溶性酶用物理或 化学方法处理使之成为不溶于水的但仍具有酶活性的状态并在一定的空间范围内起催化作用 能反复和连续使用的酶 本文作者以壳聚糖作为载体戊二醛作为交联剂将乙醇脱氢酶固定 化与游离的乙醇脱氢酶作比较进而研究壳聚糖固定化乙醇脱氢酶的酶学性质为工业生产提供更 多的理论依据 材料与方法 材料 壳聚糖 自制脱乙酰度大于 乙醇脱氢酶为公司产品戊二醛由上海试剂厂分 装浓度为 其他试剂均为分析纯或者生化试剂 方法 甲壳素及壳聚糖的提取 称取 干虾壳置于 的溶液中浸泡期间不断搅拌使虾壳中钙质充分分解用自来水充 收稿日期 基金项目 上海市能源与育种重点实验室项目上海大学生命科学学院大学生创新项目 通信作者 马中良中国上海市宝山区上大路 号上海大学生命科学学院邮编 第 期 李雪张彩艳童凯琛等壳聚糖固定化乙醇脱氢酶的酶学性质研究 分洗净直至呈中性后用 的溶液浸没并放置于温度设定为 的烤箱内 以 上取出过滤重复脱钙去蛋白便可得到甲壳素将得到的甲壳素用 的浸没放置于温度设 定为 的烤箱内 以上进行脱乙酰化反应后得到壳聚糖 壳聚糖固定化酶的制备 称取 壳聚糖溶于的醋酸溶液中缓慢搅拌过夜使其充分溶解并抽滤滤液用 调节至 产生大量白色絮状沉淀后抽滤用蒸馏水洗至中性后悬浮于 缓冲液 中再加入 乙醇脱氢酶原酶液搅拌吸附 加入戊二醛使其终浓度为 搅拌 吸附 抽滤水洗制备获得壳聚糖固定化酶于 冰箱中保存备用 蛋白酶浓度的测定 采用法对乙醇脱氢酶溶液蛋白浓度进行测定并在 波长下测定吸光度变化值 酶活力的测定 称取 的固定化醇脱氢酶加入 缓冲溶液 下水浴 然后加入 乙醇和 下水浴 回收固定化酶反应液立刻置 于沸水中灭活 并在 波长下测定吸光度变化值