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中华危重病急救医学 2014 年11 月第26 卷第11 期　Chin Crit Care Med，November 2014 ，Vol.26 ，No.11 · 785 · · 论著· Ezrin 蛋白在肿瘤坏死因子致大鼠肺微血管内皮细胞 炎性损伤中表达及Rac 1 信号通路的影响 【摘要】 目的 探讨肿瘤坏死因子- α（TNF- α）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC ）中Ezrin 蛋白 及其磷酸化（p-Ezrin ）表达的变化，以及小G 蛋白家族成员Rac 1 对其的影响。方法 将体外培养的SD 大鼠 PMVEC 分别进行TNF- α刺激时效实验和Rac 1 通路干预实验。① 时效实验：以10 μg/L TNF- α分别刺激 PMVEC 0 、 0.25 、 0.5 、 1 、 3 、 6 、 12 、 24 h 后，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot ）检测Ezrin 及p-Ezrin 的 表达。② Rac 1 通路干预实验：以200 μmol/L Rac 1 特异性抑制剂NSC 23766 与PMVEC 预孵育0.5 h 再加入 续孵育，3 h 后检测p-Ezrin 表达，同时设空白对照组（1% 胎牛血清）及TNF- α或NSC 23766 10 μg/L TNF- α继 单独刺激组。结果 ① PMVEC 中仅低量表达Ezrin ，且TNF- α刺激对Ezrin 无明显影响。TNF- α刺激 PMVEC 0 h 时p-Ezrin 蛋白表达〔即p-Ezrin/Ezrin （灰度值）〕为0.21 ±0.03 ，刺激0.25 h 时p-Ezrin 蛋白表达即 开始升高（0.53 ±0.19 ），3 h 达高峰（1.68 ±0.30 ），然后逐渐下降，24 h 时仍高于基础水平（0.87 ±0.18 ），组间比 较差异有统计学意义（F ＝62.200 ，P ＝0.000 ），说明TNF- α可呈时间依赖性增加Ezrin 磷酸化。② 与空白对照 组比较，TNF- α和NSC 23766 单独刺激组均能诱导p-Ezrin 表达增加（TNF- α组：0.92 ±0.12 比0.68 ±0.16 ， t ＝-2.864 ，P ＝0.020 ；NSC 23766 组：1.33 ±0.24 比0.68 ±0.16 ，t ＝-5.429 ，P ＝0.000 ）；NSC 23766 与TNF- α 共同孵育可使p-Ezrin 表达较TNF- α单独刺激组进一步增加（2.14 ±0.18 比0.92 ±0.12 ，t ＝-14.670 ，P ＝ 0.000 ），各组间差异有统计学意义（F ＝73.810 ，P ＝0.000 ）。结论 Ezrin 磷酸化表达增加参与了TNF- α诱导 的PMVEC 损伤，抑制Rac 1 信号通路可通过上调Ezrin 磷酸化表达参与TNF- α对PMVEC 的致伤效应。 【关键词】 Ezrin 蛋白； 肿瘤坏死因子- α； 肺微血管内皮细胞； Rac 1 信号通路 Role of Ezrin in the injury of rat pulmonary microvascular endothelial cells induced by tumor necrosis factor- α and the impact of Rac 1 Tang Sihui ， Yue Yang ， Sun Gengyun. Department of Respiratory Medicine ， the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University ， Hefei 230022 ， Anhui ， China Corresponding author ： Sun Gengyun ， Email ： sungengy@126.com 【Ab