小麦蛋白质二硫键异构酶的毕赤酵母表达及重组酶性质 - 现代食品科技.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2017, Vol.33, No.5 小麦蛋白质二硫键异构酶的毕赤酵母表达及重组酶 性质研究 1,2 3 1,2 1,2 3 1,2 曹佩 ，卫娜 ，刘光 ，王敬敬 ，徐勇 ，胡松青 （1.华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510640）（2.广东省天然产物绿色加工与产品安全重点实验室， 广东广州 510640）（3.广东省食品工业研究所，广东广州 510308） 摘要：为开发天然健康的酶制剂型面粉改良剂，利用毕赤酵母表达了小麦蛋白质二硫键异构酶（wheat protein disulfide isomerase ， wPDI ）。以克隆质粒pMD19-T-wpdi 为基因模板，亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K 中，并以毕赤酵母GS115 为宿主菌进行真核表 达，表达产物经硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化后，与大肠杆菌重组wPDI 的酶学性质进行了比对，并利用粉质仪探究了重组wPDI 对面粉品质的影响。结果表明，克隆的 wpdi 基因含有 1347 个碱基，共编码449 个氨基酸，分子量约为 50.2 ku。Western blot 结果显 示，构建的重组酵母表达系统成功表达了重组 wPDI；阴离子交换层析获得的wPDI 的酶学性质研究表明，酵母重组wPDI 表现出了 二硫键氧化还原活性和分子伴侣活性，其还原活性高于大肠杆菌重组 wPDI ，氧化活性和分子伴侣活性低于大肠杆菌重组 wPDI。粉 质实验结果表明，相对于大肠杆菌重组 wPDI ，酵母重组wPDI 表现出了更强的弱化面粉加工品质能力。研究结果为 wPDI 的深入研 究及其在面制品中的应用奠定了基础。 关键词：小麦蛋白质二硫键异构酶；毕赤酵母；克隆表达；酶学性质；粉质特性 文章篇号：1673-9078(2017)5-77-84 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.5.013 Expression of Wheat Protein Disulfide Isomerase in Pichia pastoris and the Properties of the Recombinant Enzyme 1,2 3 1,2 1,2 3 1,2 CAO Pei , WEI Na , LIU Guang , WANG Jing-jing , XU Yong , HU Song-qing (1.School of Food Science and Technology, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) (2.Guangdong Province Key Laboratory for Green Processing of Natural Products and Product Safety, Guangzhou 510640, China) (3.Guangdong Food Industry Institute, Guangzhou 510308, China) Abstract: Wheat protein disulfide isomerase (wPDI) was expressed in Pichia pastoris to develop a novel and healthy enz