转录因子增强激活子结合蛋白-4 对子宫内膜癌 - 中华临床医师杂志.pdf

中华临床医师杂志( 电子版)2016 年11 月第10 卷第22 期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),November 15,2016,Vol.10,No.22 ²3377 ² ²基础论著² 转录因子增强激活子结合蛋白-4 对子宫 内膜癌细胞恶性增殖的影响 1 2 3 1 4 4 4,5 5,6 别延红 宋林泉 郑志明 王金生 蔡育波 刘琼茹 张鑫 曾今诚 【摘要】 目的 利用体外细胞模型，研究转录因子增强激活子结合蛋白-4 （TFAP4 ）对子宫内 膜癌细胞恶性增殖的影响及探讨其可能的作用机制。方法 利用小干扰RNA 技术沉默子宫内膜癌细 胞（HEC-1-A 和RL95-2 ）内源性增强激活子结合蛋白-4 （AP-4 ）的表达后，通过平板克隆及软琼脂 克隆形成实验检测肿瘤细胞单克隆形成及非锚定生长能力的变化。利用碘化吡啶染色流式细胞术分 析肿瘤细胞周期的变化，并利用荧光定量PCR 技术检测CDKN1A 的转录水平。利用生物信息学分 析预测CDKN1A 的启动子区域内是否存在AP-4 及锌指蛋白Pokemon 的结合位点，进一步利用染色 体免疫共沉淀技术验证AP-4 及Pokemon 是否共同结合到CDKN1A 的启动子区域。每次实验设3 个复孔，每个实验重复 3 次以上，两组间数据比较采用 t 检验，多组间数据比较采用单因素方差 分析，检验水平 α=0.05 。结果 沉默内源性 AP-4 的表达后，两种子宫内膜癌细胞（HEC-1-A 和 RL95-2 ）的克隆形成能力降为0.38 倍至0.55 倍，软琼脂克隆形成能力降为0.21 倍至0.27 倍。进一 步发现，沉默内源性AP-4 的表达能诱导两种子宫内膜癌细胞发生G0/G1 期阻滞并增加CDKN1A 的 转录水平为7.34 倍至9.22 倍。公共数据库分析显示，CDKN1A 的启动子区域内存在AP-4 及Pokemon 相邻的结合位点，沉默内源性AP-4 后能同时降低AP-4 及Pokemon 与CDKN1A 的启动子区域的 结合，其中AP-4 的富集率降至0.07 倍至0.21 倍，Pokemon 的富集率降至0.04 倍至0.18 倍。结论 沉 默内源性AP-4 能在体外模型中，抑制子宫内膜癌细胞的恶性增殖，其机制可能与破坏了AP-4/Pokemon 转录复合物对CDKN1A 的转录抑制，从而阻抑了肿瘤细胞的周期运行。 【关键词】 转录因子AP-4 ； 子宫内膜肿瘤； 锌指蛋白Pokemon ； 恶性增殖 Transcription factor AP-4 promotes endometrial cancer cells malignant proliferation in vitro Bie 1 2 3 1 4 4 4,5 Yanhong , Song Linquan , Zheng Zhiming , Wang Jinsheng , Cai Yubo , Liu Qiongru , Zhang Xin , Zeng Jincheng5,6. 1Department of Pathology, 2Department of General Surgery, 3Department of Pharmacy, Xiaolan Peoples Hospital of Zhongshan, Zhongshan 528415, China; 4Department of Pathology, Jiangmen Central Hospital, Jiangmen 529030, China; 5Key Laboratory for Medical Molecu