液相色谱鄄质谱联用分析流感病毒感染引起宿主蛋白类泛素化修饰.pdf

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第6期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年6月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 850~856 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.151011 液相色谱鄄质谱联用分析 流感病毒感染引起宿主蛋白类泛素化修饰 1 2 1 3 3 *3 彭其胜摇 李光谱摇 孙万春摇 杨静波摇 全桂花摇 刘 宁 1(吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春 130062) 2 3 (吉林亚泰生物药业股份有限公司,长春 130033)摇 摇 (吉林大学第二医院,长春 130041) 摘摇 要摇 干扰素刺激基因15编码蛋白质(Interferon stimulated gene 15 kDa protein,ISG15)是最早被鉴定的类泛 素分子蛋白质,在病毒感染和免疫调节等方面具有重要作用。 本研究利用免疫沉淀技术将被类泛素ISG15修饰 的蛋白富集纯化,采用液相色谱鄄质谱联用技术对流感病毒感染A549宿主细胞过程中产生的类泛素ISG15修饰 蛋白进行了分析。 实验结果表明,在流感病毒感染的实验组A549 细胞中,鉴定到了22种来源于宿主细胞的 ISG15修饰的蛋白,包括类泛素蛋白ISG15、细胞周期蛋白鄄T1、热休克蛋白71、钙调素结合蛋白、真核翻译起始因 子等,以及1种来源于流感病毒的非结构蛋白NS1。 在鉴定的22种宿主蛋白中,有6种蛋白在未感染病毒的对 照组A549细胞中也得到鉴定,包括膜联蛋白A1、果糖二磷酸醛缩酶A、线粒体三磷酸腺苷合成酶亚基g、烯醇化 酶、肌动蛋白、微管蛋白。 生物信息学分析表明,流感病毒感染引起的ISG15修饰的宿主蛋白分别归属于9个不 同的蛋白分类,包括细胞骨架蛋白、分子伴侣蛋白、酶调节剂、核酸结合蛋白、激酶类、转移酶类、转录因子、氧化 还原酶类以及结构蛋白。 本研究为大规模分析鉴定ISG15修饰蛋白提供了一种特异、有效的研究方法。 关键词摇 流感病毒;类泛素蛋白;干扰素刺激基因15编码蛋白质;液相色谱鄄质谱联用 1摇 引摇 言 流感病毒等微生物在宿主细胞中有效复制和拮抗宿主免疫反应涉及到细胞内的多种重要信号转导通 [1] [2] [3] [4] 路,如WNT ,NF鄄噩B ,MAPK ,PI3K/ Akt 等,是一个非常复杂的生物学过程。 在此过程中,蛋白质 翻译后修饰如泛素和类泛素化修饰起到了十分重要的作用。 泛素和类泛素化修饰是一类最富诱导性和可 [5] 逆性的蛋白修饰 。 其中,干扰素刺激基因15蛋白(Interferonstimulatedgene15kDaprotein,ISG15)类泛 [6,7] 素化修饰在调节病原微生物的感染和复制、宿主细胞先天免疫反应等过程中发挥着极其重要的作用 。 ISG15是由干扰素诱导产生的一种分子量约为15 kDa 的蛋白质,由两个泛素样的小亚基通过一个短铰链 [8] 区连接组成 。 ISG15对蛋白质的修饰作用是可逆的共价修饰,可以调节底物蛋白的稳定性、功能活性状 [9] 态以及细胞内定位等 。