血脂测定及方法学评价.ppt

血脂测定及方法学评价 基本内容 1.基本概念 2.血脂测定的常规要求 3.血浆脂质测定 4.血浆脂蛋白测定 5.载脂蛋白测定 6.血浆脂蛋白代谢相关蛋白质与酶的测定 7.基因突变分析 基本概念 血脂 血浆脂蛋白 载脂蛋白 脂蛋白受体 HDL-C、LDL-C、VLDL-C 血脂 1.定义：指血清/浆中所有脂类物质。 2.种类：总胆固醇（游离胆固醇FC　＋　胆固醇酯CE） 　　　　　甘油三酯 　　　　磷脂 　　　　糖脂 　　　　游离脂肪酸 　　　　类固醇 　　　　固醇 血浆脂蛋白（lipoprotein,LP） 定义 共同特征 分类 血浆脂蛋白（lipoprotein,LP） 定义： 脂类不溶或微溶于水，无论是内源性或外源性脂类均以溶解度较大的脂蛋白复合体形式在血液循环中运输。 LP 共同特征： 核心：不溶于水的TG和CE 外壳：少量蛋白质和极性的PL、FFA 桥梁：PL的极性部分与Prot结合，非极性部分 与其他脂类结合 LP 分类： 超速离心法： CM→VLDL→LDL→HDL→Alb-FFA complex 琼脂糖电泳法： CM→β→前β→ α 即： 　 CM→VLDL→IDL→LDL→LP(a) → HDL CM　前β β　　　前β 　　α 载脂蛋白(apolipoprotein, apoprotein,Apo) 定义：脂蛋白中的蛋白质部分，具有结合及转运脂质、稳定LP，作为脂蛋白受体的配体，参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程，激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类等作用。 分类： Apo A、B、C、D、E、H、J、（a） Apo A（AⅠ、 AⅡ 、AⅣ） Apo B（ B 100、 B48） Apo C（CⅠ、 C Ⅱ、CⅢ 0~2） 脂蛋白受体 定义：一类位于细胞膜上的糖蛋白。以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对LP的摄取与代谢，进一步调节细胞外LP的水平。 类型： LDL受体 VLDL受体 清道夫受体 HDL-C、LDL-C、VLDL-C 在LP中有prot、ch、PL等，其中ch含量较为稳定，目前以测定LP中ch含量的方法作为LP的定量依据。 血脂测定的常规要求 在显著改变饮食习惯后应等待3~6个月测血脂，同时要求体重恒定。 采血前12h不要饮酒、咖啡、奶 病人禁食12h以上，采取静脉血（止血带使用不多于1min），采血时病人取坐位或半卧位（抽血前至少静坐5min，站立使血脂↑） 血脂与年龄、性别、种族等生物因素有关 血脂与饮食习惯、吸烟、运动及应激等生活方式有关 血脂与临床（疾病、药物）有关 血脂与血标本采集与处理有关 一般多用血清标本，用血浆时选用EDTA-Na2抗凝，不用肝素 四个基本指标（TC、TG、HDL-C、LDL-C）在4℃保存3天，-20 ℃稳定数周，-70 ℃以下长期保存 一次检查结果可疑应几周后复查再作诊断 血浆脂质测定 1.总脂质测定 2.总胆固醇（TC）测定 3.甘油三酯（TG）测定 4.磷脂测定 5.游离脂肪酸测定 总脂质测定 方法： 1. 脂质抽提法 2. 直接测定法 总胆固醇（TC）测定 CE占70%，FC占30% 分布：LDL中最多 其次是HDL和VLDL CM最少 意义： TC高低通常反映LDL-C的高低，但在一定程度上也受HDL-C和VLDL-C水平的影响。 总胆固醇（TC）测定方法 同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）：决定性方法 化学法：其中ALBK法为参考方法 酶法：其中胆固醇氧化酶法为常规方法 TC测定的化学试剂显色法（强酸试剂显色法） 步骤： 1.抽提（正己烷、乙醇、石油醚等） ↓ 2.皂化（KOH） ↓ 3.洋地黄皂苷沉淀纯化 ↓ 4.显色比色 Zak反应： ch+浓h2so4+Fe3++冰醋酸→紫色 （563nm） L-B反应： ch+浓h2so4+醋酸酐+冰醋酸→绿色（410nm） 四步法 三步法（正己烷抽提L-B反应显色为公认的参考方法） 二步法 一步法：其中LB反应直接法 为常规方法 TC测定的胆固醇氧化酶法 原理：