小麦中转基因成分pcr与实时荧光pcr的定性检测低限 - 麦类作物学报.pdf

麦类作物学报 　2009 ,29 (2) : 199205 J ournal of Triticeae Crop s 小麦中转基因成分 PCR 与实时荧光 PCR 的定性检测低限 1 1 2 白 月 , 栾凤侠 , 王 珣 ( 1. 黑龙江出入境检验检疫局 ,黑龙江哈尔滨 15000 1 ; 2 黑龙江省农业科学院生物技术研究所 ,黑龙江哈尔滨 150086) 摘 　要 : 为了确定小麦转基因成分 PCR 和实时荧光 PCR 方法的定性检测低限 ,将转基因小麦 B73 与非转基 ( ) ( ) 因小麦 检测外源基因 、小麦与大米 检测内源基因 分别进行质量分数配比后提取 DN A 用于测定相对检测低限 , 再将 100 %转基因小麦 B73 的DNA 进行浓度稀释用于测定绝对检测低限 ,并应用已知的 N OS 、ba r 、ubiqui ti n , ui dA ( GUS) 外源基因和 Wx 012 、GA G56D 内源基因的引物和探针对模板 DNA 分别进行 PCR 与实时荧光 PCR 扩增 。 ( ) 结果表明 ,最终确定 PCR 方法检测小麦转基因成分的相对检测低限为 0 . 1 % 质量分数 ,绝对检测低限为 0 . 5 ng/ μ ( ) μ L ;实时荧光 PCR 方法的相对检测低限为 0 . 1 % 质量分数 ,绝对检测低限为 0 . 0 1 ng/ L 。所确定的检测低限可 满足国家对转基因产品的最低标识要求 。 关键词 : 转基因小麦 ; PCR ;实时荧光 PCR ;绝对检测低限;相对检测低限 ( ) 中图分类号 :S5 12 . 1 ; S330 　　　　文献标识码 : A 　　　　文章编号 :1009104 1 2009 0219907 Detection L imits of PCR and Realtime PCR f or Genetically Modif ied Components in Transgenic Wheat 1 1 2 BAI Yue , L UAN Fengxia , WANG Xun ( 1. Heilongj iang Ent ryExit In sp ection and Quarantine Bureau , Harbin Heilongj iang 15000 1 ,China ; 2 . Biot echnology Research Cent er , Heilongj iang Academy of A gricult ural Sciences , Harbin , Heilongj iang 50086 ,China) Abstract : Thi s st udy i s on t he