绿豆胰蛋白酶抑制剂bbi诱导肺腺癌a549细胞凋亡 - 华南师范大学学报.pdf

华南师范大学学报 （自然科学版） ２０１３年５月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ 第４５卷第３期 　　　　　　　　　　　　 Ｍａｙ２０１３ 　　　　　　　　　　　 （ＮＡＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥＥＤＩＴＩＯＮ） 　Ｖｏｌ．４５　Ｎｏ．３ 文章编号：１０００－５４６３（２０１３）０３－００９１－０４ 绿豆胰蛋白酶抑制剂 ＢＢＩ诱导肺腺癌 Ａ５４９细胞凋亡 王莎莎，马　岳，李玉银，罗深恒，刁爱坡，龙民慧 （天津科技大学生物工程学院，天津３００４５７） 摘要：研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂ＢＢＩ对人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖抑制作用和对肺腺癌Ａ５４９细胞凋亡的影响．结果 显示：绿豆ＢＢＩ对人肺腺癌Ａ５４９细胞的增殖有明显抑制作用，绿豆ＢＢＩ可以促使人肺腺癌Ａ５４９细胞出现明显的染 色质浓缩和凋亡小体，诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞的凋亡．说明绿豆ＢＢＩ能抑制人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖、诱导人肺腺 癌Ａ５４９细胞凋亡，为绿豆ＢＢＩ抗肿瘤效应提供了依据． 关键词：绿豆胰蛋白酶抑制剂ＢＢＩ；肺腺癌Ａ５４９细胞；细胞凋亡 中图分类号：Ｒ９１５　　　文献标志码：Ａ　　　ｄｏｉ：１０．６０５４／ｊ．ｊｓｃｎｕｎ．２０１３．０４．０２０ 　　绿豆（Ｖｉｇｎａｒａｄｉａｔａ（Ｌｉｎｎ．）ｗｉｌｃｚｅｋ）也称青小 豆，具有较高的营养与保健价值，被誉为“食中药 １　材料与方法 物”、“济世粮谷”、“清热解暑良药”．中医认为，绿 豆味甘，性凉，归心、胃经，具有清热解毒、抗过敏、保 １．１　材料 护肝脏和心血管、增强免疫力和抗肿瘤等多种功能． 肺腺癌细胞Ａ５４９购自美国标准菌种典藏中心 研究表明，豆类具有抗肿瘤功效［１－２］．从绿豆中提取 （ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）；Ｆ１２Ｋ培 的绿豆胰蛋白酶抑制剂（ＭＢＴＩ），属于ＢｏｗｍａｎＢｉｒｋ 养液购自Ｇｉｂｃｏ公司；胎牛血清购自杭州四季青生 类型抑制剂 （ＢｏｗｍａｎＢｉｒｋｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，简称 物工程材料有限公司；ＭＴＴ购自北京索莱宝科技有 ［３］ ［４］ 限公司；流式细胞仪为美国ＢＤ公司产品．Ｃａｓｐａｓｅ３ ＢＢＩ） ．ＢＢＩ首次由 Ｂｏｗｍａｎ 从大豆中分离， ［５］ 兔抗人抗体购自美国ＡＢＢＩＯＴＥＣ公司；羊抗兔二抗 ＢＩＲＫ 对此类抑制剂进行纯化并定义．ＢＢＩ是单肽 链，由７１个氨基酸组成，包含７个二硫键，相对分子 购自美国ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ转膜仪购 ３ ３ 自ＢｉｏＲＡＤ公司． 量为８×１０（单子叶植物或双子叶植物）或１６×１０ ［６］ （单子叶植物），约占０６％ ．野生大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅｓｏ １．２　方法 ｊａ）和栽培大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ）的ＢＢＩ型抑制剂组成 １．２．１　细胞培养　将肺腺癌细胞 Ａ５４９用含质量 ［７］ 一个多基因家族 ． 分数为１０％胎牛血清，１％双抗和１％谷氨酰胺的Ｆ ［８］ ＢＢＩ具有抗癌活性 ，它可以抑制由多种物理 １２Ｋ培养液，置于 ３７℃、ＣＯ 体积分数为５％的培 ２ 或化学致癌因素引发的肿瘤，也可以抑制多种类型 养箱中培养．待贴壁细胞铺满培养瓶底８０％时即可