重组米曲霉丝氨酸羧肽酶o 的性质鉴定及脱苦应用研究 - 广东农业科学.pdf

广东农业科学 2015 年第 5 期 103 重组米曲霉丝氨酸羧肽酶O 的性质 鉴定及脱苦应用研究 陈 丹 游子娟 黄伟谦 马纳纳 罗晓春 华南理工大学生物科学与工程学院袁 广东广州 510006 冤 要 为了研究羧肽酶在蛋白水解及对蛋白水解物脱苦中的重要作用袁利用毕赤酵母表达系统对米曲 霉 A s perigillus oryzae 冤羧肽酶 O carboxy peptidase O 袁OcpO 冤进行表达遥重组米曲霉羧肽酶 O rOcpO 冤经过分子筛 和离 柱纯化袁对其进行脱糖基化及酶学性质的检测研究遥 结果表明袁该蛋白酶是以糖蛋白的形式进行表达袁 分 量约为 74 ku 袁脱糖基化后的相对分 质量约为 56 ku 袁产量约为 20.4 nKat/mL遥 该蛋白酶是一种酸性蛋白 酶袁最适 pH 值为 4.0 袁且在 pH 3.0 ~6.0 时保持稳定曰最适温度约为 40益袁具有良好的热稳定性袁在 60益孵育 1 h 后仍能保持 63% 的酶活曰PMSF 能够显著抑制该酶酶活袁证明其为丝氨酸羧肽酶遥 通过 rOcpO 对大豆蛋白和酪 蛋白的A lcalase 蛋白酶水解物的进一步水解研究发现袁rOcpO 水解对两种水解液的苦味均有明显减轻袁并且水 解度有明显升高遥 关键词 米曲霉曰 重组羧肽酶 O 曰 酶学性质曰 脱苦 中图分类号 Q814.9 文献标识码 A 文章编号 1004-874X 2015冤05-0103-06 Characteristics of carboxypeptidase O from Asperigillus oryzae expressed in Pichia pastoris and its application in protein hydrolysis and debittering CHEN Dan, YOU Zi-juan, HUANG Wei-qian, MA Na-na, LUO Xiao-chun (Sc hool of Biosc ie nce and Bioe ngineering, South China Univ ers ity of Tec hnology, Guangzhou 510006, China) A bstract: In order to study the importance of carboxy peptidase in protein hydrolysis and debittering, a truncated carboxypetidase O from A s pe rigillus oryzae was expressed in Pic hia pas toris. T he recombinant carboxy peptidase O (rOcpO) was deglycosylated and characterized after purified through Sephadex G -75 and DEAE anionic -exchange chromatography. The results showed that rOcpO was glycosylated of a molecular weight of about 74 ku and 56 ku after been deglycosy