柑橘溃疡病致病基因ptha 核定位信号肽抗血清的制备及其 - 园艺学报.pdf

园　艺 　学 　报 　2008, 35 ( 6) : 811 - 818 A cta Horticu lturae Sin ica 柑橘溃疡病致病基因 p thA 核定位信号肽抗血清的 制备及其抑菌研究 胡春华 , 徐 　磊 , 马先锋 , 龙桂友 , 刘昆玉 , 邓子牛 ( ) 湖南农业大学园艺园林学院 , 国家柑橘改良中心长沙分中心 , 长沙 4 10 128 摘 　要 : 用 PCR 法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因 p thA C - 末端的 3个核定位信号序列 , 并将其克隆 到原核表达载体 PET32 a ( + ) 上 , 经双酶切及核酸序列测定重组质粒 (p thA NL S) , 其序列与 GenB ank 中 p thA 的相关序列有 999%的同一性 。重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 (D E3) 后诱导了重组多肽的表达 , 并用 2 + N i N TA 纯化柱得到了 48 kD 的纯化重组多肽 。把重组多肽注入免疫 B alb / c 小白鼠, 制备了相应的抗血 清 , W e stern b lotting和 EL ISA 分析结果表明 , 抗血清可特异地结合重组多肽 , 亦可识别溃疡病菌 PthA 天然 蛋白, 获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测 。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片 , 发现 抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程 , 且病斑比对照小 , 但未能达到抗病程度 。p thA 基因末端核定位信号序 列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究 p thA 的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了 基础 。 关键词 : 柑橘 ; 溃疡病 ; p thA ; 抗血清 ; 病害抑制 中图分类号 : S 666　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2008) Prepara tion of An tiserum of the Recom b inan t p thA NL S and Its Inh ib ition Effect on C itru s Canker D isea se HU Chunhua, XU L ei, MA X ianfeng, LON G Gu iyou , L IU Kunyu , and D EN G Zin iu (H orticu ltu re and L andscap e Colleg e, H unan A g ricu ltu ra l Un ivers ity, N a tiona l Cen ter of C itrus Imp rovem en t, Changsha S ubcen ter, Changsha 4 10 128, Ch ina) A b stract: The sequence encoding three nuclear localizing signals (NL Ss) at the Cterm inal of p thA , wa s amp lified by PCR from the p la sm id of