猪源mx1 基因的原核表达及其抗血清制备 - 南京农业大学学报.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2012,35(1):87-91 摇 Journal of NanjingAgricultural University http:/ / 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 何丹妮,周斌,张小敏,等.猪源Mx1基因的原核表达及其抗血清制备[J].南京农业大学学报,2012,35(1):87-91 猪源Mx1 基因的原核表达及其抗血清制备 1 1* 2 1 1 1 何丹妮 ,周斌 ,张小敏 ,陈溥言 ,庞然 ,赵津 (1.南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京210095;2.南京可莱威饲料有限公司,江苏南京211134) 摘要:利用1对特异性引物,从pT鄄poMx1 中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签 的原核表达载体pGEX鄄6p鄄1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX鄄poMx1转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导 -1 表达融合蛋白并分析表达效果。 结果表明:经终浓度为0.8 mmol·L IPTG诱导后4 h,猪源Mx1基因(poMx1)在 BL21 3 (DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS鄄PAGE显示融合蛋白相对分子质量为99伊10 。 将目的蛋白切胶 后免疫Balb/ c小鼠,制备了特异性多抗血清,Western blot结果显示该抗血清与融合蛋白孵育反应后有明显的特异性条带。 结论:poMx1基因表达成功。 关键词:猪源Mx1基因;原核表达;抗血清 中图分类号:S855.3摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2012)01-0087-05 Prokaryotic expression and identification of porcine Mx1 gene and preparation of the mouse antiserum 1 1* 2 1 1 1 HE Dan鄄ni ,ZHOU Bin ,ZHANG Xiao鄄min ,CHEN Pu鄄yan ,PANG Ran ,ZHAOJin (1.Key Laboratory of Animal Diseases Diagnosis and Immunology,Ministry of Agriculture,Nanjing Agricultural University, Nanjing210095,China;2.Nanjing Clever Feed Co.Ltd. ,Nanjing211134,China) Abstract:Based on a pair of specific primers,the open reading frame of porcineMx1(1992 bp)gene (poMx1)was amplified from pT鄄poMx1byPCR.ThepoMx1genewasclonedintotheprokaryoticexpressionvectorofpGEX鄄6p鄄1andverifiedbyenzymedigestion andDNAsequenci