莫氏巴贝斯虫裂殖子犮犇荦犃表达文库的构建及免疫学 - 畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （ ）： １９３１１９３７ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 莫氏巴贝斯虫裂殖子犮犇犖犃表达文库的构建 及免疫学筛选 王锦明，刘军龙，刘爱红，马米玲，牛庆丽，任巧云，杨吉飞，刘志杰，李有全，   罗建勋，殷 宏 ，关贵全 　 （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室， 兰州 ７３００４６） 摘 要：为了构建莫氏巴贝斯虫（ ）裂殖子 表达文库，从中筛选和鉴定功能基因，利用差速离 犅犪犫犲狊犻犪犿狅狋犪狊犻 ｃＤＮＡ 　 心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子，提取总 ＲＮＡ并纯化 ｍＲＮＡ。在合成的双链 ｃＤＮＡ两端加上含 犈犮狅ＲⅠ和 犎犻狀ｄⅢ定向接头后连接到 λＳＣＲＥＥＮ载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒，并用之转染 ＥＲ１６４７，构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的ｃＤＮＡ表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选 ｃＤＮＡ文库，获得的阳性克 隆，经过测序和 软件分析鉴定，然后利用末端快速扩增技术（ ）对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。 Ｂｌａｓｔ ＲＡＣＥ 结果表明构建的 表达文库其初级库容量约为 ６ ，扩增文库为 ９ ；通过免疫学筛选， ｃＤＮＡ １．０×１０ＰＦＵ ３．５×１０ＰＦＵ 获得 个阳性克隆。测序和 分析后，鉴定出 个莫氏巴贝斯虫基因片段， 扩增获得了其中 个基因 ５０ Ｂｌａｓｔ １０ ＲＡＣＥ ８ 的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的 表达文库和筛选到的 个结构和功能基因，为研究巴贝斯 ｃＤＮＡ １０ 虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。 关键词：莫斯巴贝斯虫； 表达文库；免疫筛选； ｃＤＮＡ ＲＡＣＥ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．７２３ Ａ ０３６６６９６４２０１２１２１９３１０７ 　　　　 　　　　 犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀犪狀犱犐犿犿狌狀狅狊犮狉犲犲狀犻狀 狅犳犪犕犲狉狅狕狅犻狋犲狊犮犇犖犃犈狓狉犲狊狊犻狅狀犔犻犫狉犪狉狅犳 犵 狆 狔 犅犪犫犲狊犻犪犿狅狋犪狊犻 ， ， ， ， ， ， ＷＡＮＧＪｉｎｍｉｎ ＬＩＵＪｕｎｌｏｎ ＬＩＵＡｉｈｏｎ ＭＡＭｉｌｉｎ ＮＩＵＱｉｎｌｉＲＥＮＱｉａｏｕｎ ｇ ｇ ｇ ｇ ｇ ｙ