体内药物分析 - 仪器信息网.ppt

概述 1. 分析方法学的研究和完善 2. 体内药物的测定和研究 3. 内源性物质的测定和研究 三、体内药物分析的特点 ——由分析对象的特点所决定： 1．干扰物质多 2．样品量少、不能重复取样 3．被测成分浓度低 4．药物浓度监测和药物滥用  （一）血液 （二）尿液 优点：易得，属非损伤性取样，样品量大；尿中药物浓度高，含有缀合物或代谢物，是研究代谢物结构的首选样品；蛋白含量极低，不需去蛋白处理。 缺点： 与血药浓度不相关，难以反映药物作用过程；受肾功能、pH影响；难以定时定量取样，易污染；所含成分复杂，已知其中有紫外吸收的化合物就达数十种。 尿样测定多用于药物剂量回收、尿清除率研究。 （三） 唾液  缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动。 S/P只有少数药物是恒定值。 蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度低。 对有些患者（昏迷）不能采集唾液样品。 二、生物样品的贮存与处理 （二）有时，还应考虑加入稳定剂： 酶抑制剂：一些酯类药物，如普鲁卡因、阿糖胞苷，易受血浆酯酶作用而发生水解，则应在采样后立即加入酶抑制剂如氟化钠等。 抗氧化剂：一些易氧化的药物，可加入维生素C或其它抗氧化剂。如血浆中儿茶酚类药物常规保存仅4周，若加入适量VC，则能保存10周。 第二节 生物样品的预处理与制备 （一）经有机破坏的方法 （二）去除蛋白质 （三）分离、纯化与浓集 1. 液-液萃取法（LLE） 离子对提取 液-液回提（多次提取） SPE优点：1、不发生乳化；2、适应的极性范围较广；3、提取效率高；4、方便快速；5、溶剂用量少；6、易于自动化；7、室温下操作，尤其适于处理挥发性及对热不稳定的药物。 目前，商品化固相提取小柱（cartridge）的应用已比较普遍。 （四）化学衍生化 常用的烷基化试剂：碘庚烷、叠氮甲烷、氢氧化三甲基苯胺（TMAH）等； 常用的酰化试剂：乙酸酐、丙酸酐等； 硅烷化试剂：三甲基氯硅烷（TMCS）、双-三甲基硅烷乙酰胺（BSA）、双-三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）、三甲基硅咪唑（TMSI）等。 具有光学异构体药物的分离可采用不对称试剂，使其生成非对映异构体衍生物，然后用GC法进行分析测定。常用的不对称试剂有：（S）-N-三氟乙酰脯氨酰氯、（S）-N-五氟乙酰脯氨酰氯等。 附一，现年利润ruen20万、 在所查的24篇抗癫痫药物的HPLC分析中，溶剂萃取法22篇，蛋白沉淀法2篇，无SPE法。 福清烤鳗厂 用液-液萃取 光谱分析法在样品预处理时，就需经过复杂的精制处理，如若没有紫外吸收，衍生反应后，（表3-11，）这些衍生剂都有紫外，还要进一步进行精制处理，经过这么多处理步骤后，其结果还可靠吗？ 前面原因是指GC，后面检测器不够灵敏是指没有紫外吸收、不具荧光。（画色谱示意图） 各种衍生化试剂见表3-10，具体的衍生化条件可查阅文献。 3. 当PH值低于蛋白质等电点时，蛋白质以阳离子形式存在。此时加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。常用的强酸有--- 4.当PH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。 那些做固相萃取的文献会常提到LLE有以下缺点： 回收率低----没选好有机溶剂 样品用量大----只要药物的有效血药浓度达到10μg/ml以上，如茶碱、苯妥英钠、卡马西平、丙戊酸钠，我只用0.1ml 的血浆。 时间----10多min 溶剂用量------1ml以下 毒性--------------用乙酸乙酯、叔丁基甲基醚，尽量不用氯仿 乳化-----用EP管，从没有过 但有的文献-----1ml 血浆 5ml氯仿 最后只取20微升进样 1） 酸用量、浓度和水解温度等条件应通过实验确定 对于遇酸及受热不稳定的药物，可以改用酶水解法 国内文献中，缀合物水解的文献较少。在新药研究中有 亲脂性键合相硅胶SPE柱缺点： 小柱跑干—不吸附，----操作过程需仔细控制 对极性化合物—保留不足---药物及其代谢物难以同时提取 对碱性化合物回收不足---强硅羟基相互作用—碱性样品回收率低 因此，条件控制不好，将极大降低回收率 表3-6处补上叔丁基甲基醚的参数 2 SPE填料 SPE技术的核心是填料。可应用于SPE的填料种类繁多。 通常，人们可以根据需要选择填料自行装柱，而众多的商品化小柱为分析的便利及精密提供了可靠的保证。目前，世界上多个公司都生产SPE柱，如AnalytichemInt公司的Bond Elut、Waters公司的Sep-Pak系列小柱已广泛地用于各种分析工作中;国内也