真正异嗜性抗体阻滞试剂.ppt

泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158 異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答 Q1. 什麼時候會需要HBR? 正在發展三明治免疫檢測。 曾有檢測到假陽性反應之檢體。 確認檢體為假陽性，而非真陽性檢體。 檢測結果受到HAMA或異嗜性抗體干擾。 查出影響檢測結果之假陽性檢體類別。 檢測需要阻滯劑。阻滯劑為HAMA阻滯劑或異嗜性阻滯試劑? 需要一個通用阻滯劑加至各種檢測系統。 評估一個阻滯劑的要素。 病人血清/血漿中的內生性異嗜性抗體，可結合其它屬種的免疫球蛋白，包括用來產生抗體並作為免疫分析試劑的屬種 (species)。 這些抗體會干擾免疫分析系統，造成比實際分析物濃度更高的檢測值，因此有誤判檢體的可能。 雖然異嗜性抗體可以影響各樣檢測，其主要作用於三明治免疫分析系統。 “三明治”法至少使用兩種針對不同表位 (epitode) 抗原的抗體，其一抗體為固相 (solid phase)，另一則是在溶液中，有如125I ，酵素，螢光劑，化學冷光等標幟物。一般而言，檢體中之抗原與兩抗體結合，標幟抗體與固相相結合的數量與檢體內的抗原濃度成正比（圖1）。 不過， 異嗜性抗體在無抗原的情況下，也可連結這兩個抗體，因而增加結合標幟抗體 (labeled antibody)的濃度（圖2 ）。 HBR 的特異性結合反應，加上1000倍以上的親和力，使得 HBR 具有以下優點，超越傳統阻滯方法： 1. 使用 HBR，只需少量蛋白質作阻滯，不影響檢測信號。 2. HBR 比傳統方法能有效阻滯更多假陽性。 3. HBR 可阻滯所有anti-屬種 (anti-rabbit, anti-goat, anti-sheep, 和 anti- mouse) 反應。 4. HBR 可阻滯所有抗鼠單株抗體的 subtypes (如anti-mouse IgG1, anti-mouse IgG2等) 5. 使用 HBR，不限定於某些檢測。如同某些狀況，使用分析物特異 單株抗體用以作阻滯。 干擾因素是免疫球蛋白，目前已發現有 IgG 和 IgM 異嗜性抗體。 發生機率極高。依病人人口而別，目前有高達40 ％的發生率，至少有10 ％的案例已被存檔 (documented) 備查。 不同檢體有不同程度的干擾，單一病人體內的干擾程度也會隨著時間而變化。 異嗜性抗體並非針對特定屬種，但可與多種動物抗體結合。因此，干擾非僅限於以單株抗體為基礎的檢測。 干擾可能是藉由檢測系統內的抗體 Fc 部位所傳達。 異嗜性抗體並非單一和特異的實體，而是一個多成份 (multi-component) 的現象，由多種抗體所構成，可引發干擾，某些或全部抗體可能只存在於特定的檢體中。 EIA 似乎較 RIA 容易受到干擾，這可能是因為抗體的 Fc 部份在鏈結 (conjugation) 時多數被改變，故較易受影響。 有許多可誘發病人身體產生異嗜性抗體的因素，其中包括： 類風濕性關節炎 (慢性發炎性) 注射疫苗 流行性感冒 動物接觸 (飼養寵物) 過敏 特定食物 (乳酪) 輸血 動物輔助治療 (胸腺細胞,羊細胞,胚胎細胞) 可採取以下方法來分辨假陽性和偵測異嗜性抗體干擾： 檢測數據和臨床診斷或其它檢測不符。 通常表現正常的某些檢體，經稀釋後表現數據不一致。 利用親和層析法，將特定分析物自檢體中排除，以確定信號是否已被排除，若訊號仍在，即為假陽性。 加入異嗜性抗體阻滯劑，觀察檢測值是否降低。 異嗜性抗體 HAMA 阻滯劑是一種生物製劑，一旦加入免疫分析系統中，可有效防止異嗜性干擾，以避免在無抗原的情況下連結兩個 (補捉及標幟) 抗體。 目前有兩種主要的阻滯劑： (1) HAMA (human anti-mouse antibodies) (2) 異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與阻滯試管(HBT) (1) HAMA HAMA只阻滯一種特異的人類抗屬種抗體之活性（如人類抗鼠抗體），通常為非針對目標分析物的正常血清，正常 IgG ，單株抗體等。 將這些“被動阻滯劑 (passive blocking agents)” ，過量加入於檢體中，使得檢體中任何特異抗屬種抗體，易與低濃度之特異免疫反應物結合。 這些試劑用途有限，因為僅能排除異嗜性干擾的一部份，而異嗜性干擾牽涉許多成份。常觀察到的是，將鼠 IgG 加至一雙單株 (double monoclonal) 抗體三明治檢測時，只能改正部份異嗜性干擾。 (2) 真正異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與試管 (HBT) 這些製劑可排除各類型的異嗜性干擾。 內含“主動阻斷試劑 (active blocki