口蹄疫及猪水疱病抗体间接型elisa 检测方法之研发 - 家畜卫生试验所.pdf

57 家畜衛試所研報No.48 ：57~74 (2013 ） 口蹄疫及豬水疱病抗體間接型ELISA 檢測方法之研發 1,2* 1 1 1 1 1 1,2 陳姿菡 、潘居祥 、李 璠 、林有良 、王明隆 、石佳霓 、蔡向榮 1 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 2 國立臺灣大學獸醫專業學院 摘要 本試驗針對口蹄疫 （FMD ）及豬水疱病 （SVD ）等豬隻高度傳染水疱性疾 病，主要利用原核表現系統完成建立此二種疾病區別診斷之FMDV 及SVDV 間 接型ELISA 抗體檢測方法 。針對FMDV 結構蛋白 （SP ）VP1 免疫決定位之基因 組核酸序列設計引子，以 RT-PCR 方法增幅病毒核酸，建構基因重組原核表現 系統，並量產重組結構蛋白應用於ELISA 之開發 。經試驗結果顯示分子量如預 期之大小約 25 kDa ，且重組蛋白質與豬抗血清之分析特異性呈陽性反應。以免 疫、感染及SPF 等豬血清之FMDV-SP 抗體檢測診斷敏感性達 84.1 %-96.7 % 及 診斷特異性約達93 %-100 % 。另設計豬水疱病病毒 SVDV-SP 之免疫決定位之核 酸序列之特異性引子，以 RT-PCR 方法增幅病毒核酸，建構基因重組原核表現 系統，並定序確認核酸序列符合，且重組蛋白分子量如預期之大小約100 kDa ， 可與豬抗血清呈專一特異性之陽性反應。於SVDV-SP ELISA 之結果顯示本方法 的最低分析敏感性可達 10-2 倍，且於 30 支標準血清檢測結果最早在感染後第6 天可被測出SVDV-SP 抗體，其診斷敏感性及診斷特異性皆可達100 % ，於進口 豬隻及田間之血清樣品經與二種商品化ELISA 套組比較SVDV-SP 抗體檢測結果 符合率各別為90-93 % 及 85-88 % 。最後證實FMDV 及SVDV 抗體間接型ELISA 檢測方法可檢出專一性的抗體而無交叉反應，且不會與水疱性口炎 （VS ）抗體 產生非特異性反應。 關鑑字：口蹄疫 、豬水疱病 、結構性蛋白 、抗體檢測 、反轉錄聚合酶鏈反應 、酵素連結免疫 吸附法 、病毒血清中和試驗。 緒言 包括結構 （SP ）與非結構蛋白 （NSP ）等病毒蛋白， 本病毒含有7種血清型[2, 20] 。豬水疱病係豬隻之高 口蹄疫 （FMD ）、豬水疱病 （SVD ）、水疱性口 度傳染性疾病，其病原屬於小核醣核酸病毒科 炎 （VS ）及豬水疱疹 （VES ）等均為豬隻高度傳染水 Picornaviridae 腸病毒屬Enterovirus 之豬水疱病病 疱性疾病[18] 。FMD 病毒是正股RNA 病毒，在 毒，病毒顆粒大小30-32 nm ，不具封套，核酸為單 Picornaviridae 科之成員中隸屬於 Aphthovirus 屬， 股正鏈RNA 。病毒抗原性和人類腸病毒中的克沙奇病 為小的無封套病毒，含有8.5 kbp基因可轉譯出12個 毒B5群CVB5相似性極高，採用免疫血清學方法難以 *抽印本索取作者 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 58 家畜衛試所研報No.48 ：57~74 (2