分子诊断常用技术50 年的沿革与进步 - 中心实验室.pdf

·２０２ · 检验医学２０１４ 年３ 月第２９ 卷第３期　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ３． 文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０３０２０２０７　　　中图分类号：Ｑ５０３　　　文献标志码：Ｂ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０３．００２ 分子诊断常用技术５０ 年的沿革与进步 吴之源，　张　晨，　关　明 （复旦大学附属华山医院，上海２０００４０） 　　摘要：分子诊断技术即是利用分子生物学方法对人类及病原体的各类遗传物质进行检测，以帮助对疾 病进行诊断。自液相杂交技术诞生以来，分子诊断已走过了５０ 年的历程。本文将以技术原理出发对分子诊断 技术进行归类与评价，以对目前临床常用技术的沿革进行回顾，并从技术层面对分子诊断的未来进行展望。 关键词：分子诊断；分子杂交；核酸序列；分子构想变异；聚合酶链反应 　　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈａｌｆ ａ ｃｅｎｔｕｒｙ：ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｃｈａｎｇｅ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ＷＵＺｈｉｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈｅｎ，ＧＵＡＮＭｉｎｇ．　（Ｈｕａｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００４０， Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｕｓｅｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｃｉｄ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｈｕｍｅｎ ｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ａｎｄ ｔｏ ａｓｓｉｓｔ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｓｉｎｃｅ ｔｈｅ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｈａｓｗｉｔｎｅｓｓ ｉｔｓ ｒａｐｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｆｏｒ ｏｖｅｒ ｈａｌｆ ａ ｃｅｎｔｕｒｙ．Ｈｅｒｅ ｗｅ ｗｉｌｌ ａｓｓｏｒｔ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｒｉｇｉｎｓ，ｓｏ ａｓ ｔｏ ｒｅｖｉｅｗ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ａｎｄ ｔｏ ｇｅｔ ａ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｖａｒｉａｔｉｏｎ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ 　　１９６１ 年Ｈａｌｌ建立的液相分子杂交法标志着 （一）ＤＮＡ 印迹技术（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ） 人类掌握分子生物学技术对特定核酸序列进行检 ［１］ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 于１９７５ 年发明了ＤＮＡ 印迹技术， 测，开启了对疾病分子诊断的大门。１９８３ 年Ｍｕｌ 通过限制性内切酶将ＤＮＡ片段化，再以凝胶电泳 ｌｉｓ提出的聚合酶链反应（ＰＣＲ）概念，更是给分子 将长度不等的ＤＮＡ片段进行分离，通过虹吸或电 诊断技术插上了基因扩增的翅膀，大大提高了基 压转印至醋酸纤维膜上，再使膜上的ＤＮＡ变性与 因检测技术的敏感度与特异性，降低了分子诊断 核素标记的寡核苷酸探针进行分子杂交，经洗脱 的技术门槛。值此分子诊断迈过５０华诞之际，本