黄早四泛素连接酶rbx1 的分子克隆及原核表达 - 玉米科学.pdf

玉 米 科 学 2011 ，19(3)：43～46 Journal%of%Maize%Sciences 文章编号 ： 1005-0906(2011)03-0043-04 黄早四泛素连接酶 Rbx1 的 分子克隆及原核表达 吴刘记，席章营，谢丽莉，陈彦惠 (河南农业大学农学院，郑州 450002) % % % % 摘 要 ： 通过 RT-PCR 方法和基因克隆技术对黄早四 Rbx1 基因进行分子克隆和序列分析 ， 构建黄早四 Rbx1 的原核表达系统，成功表达出带有 His 标签的黄早四 Rbx1 融合蛋白，并进一步利用 His 抗体，用蛋白免疫印迹的方 法对重组蛋白进行鉴定 。 结果表明，重组蛋白能够与 His 抗体发生免疫反应，验证了黄早四 Rbx1 在原核表达系统中 成功表达。 关键词 ： 玉米；黄早四；泛素连接酶 Rbx1 ；分子克隆；原核表达；免疫印迹 中图分类号： S513.01% % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % 文献标识码 ： A Molecular Cloning and Prokaryotic Expression of Ubiquitin Ligase Rbx1 from Huangzaosi WU%Liu-ji,%XI%Zhang-ying,%XIE%Li-li,%CHEN%Yan-hui (College of Agronomy, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002,%China) % % % % Abstract:% Molecular% cloning% and% sequence% analysis% of% Huangzaosi% Rbx1% were% carried% out% based% on% RT-PCR% method%and%gene%cloning%technique.%At% the% same% time,% the% prokaryotic% expression% system% of% Huangzaosi% Rbx1% was% constructed%and%the%recombinant%protein%with%a%His-tag%was%successfully%expressed.%Furthermore,%western%blot%with% His%antibody%was%used%to%identify%the%recombinant%protein.%The%results%showed%that%the%recombinant%protein%had%im- mune%reaction%with%His%antibody,%and%verified%that%Rbx1%from%Huangzaosi%could%be%successfully%expressed%in%prokary- otic%expression%system. % % % % Key words:%Maize;%Huangzaosi;%Ubiquitin Ligase Rbx1;%Molecular%cloning;%Prokaryotic%expression;%Western%blot Rbx1 是一种进化保守的泛素连接酶蛋白，属于 其对生物体的免疫调控起着一定的作用。 Rbx 家族，它和 Rbx2 都属于 APC11 亚基的同源物[1] 。 Rbx1% 虽然在生物体内发挥着重要的作用，但 Rbx1 是在纯化小鼠肝脏 VHL 复合物的时候发现 是目前尚没有关于玉米 Rbx1 的报道。 本