结核分枝杆菌19kd-esat6 融合蛋白的克隆表达及纯化.pdf

·26 · 微 生物与 感染 2009 年 3 月第 4 卷第 1 期 Journal of Microbes and Infection, March 2009 , V ol. 4, No. 1 结 核 分枝杆 菌 19kD-ESAT6 融 合蛋 白的 克 隆表达 及 纯 化 1 2 2 1 2 2 1 拾莉 , 丁元生 , 杨华 , 刘耀婷 , 刘忠华 , 胡忠义 , 黄瑞 1. 苏州大学基础医学与生物科学学院, 苏州 215 123; 2. 同济大学附属上海市肺科医院、上海市结核病( 肺) 重 点实验室, 上海 200433 摘 要: 运用聚合酶链反应( PCR) 技术从结核分枝杆菌标准株 H37Rv 中扩增获得 19kD 脂蛋 白和 esat-6 基因片 段, 将 目的片段分别克 隆到 pMD18-T 载体, 再亚 克隆 目的片段到 同一表达载体 pET-21a, 构建重组表达载体 pET21a- 19kD-ESAT6, 转化至大肠埃希菌 BL21( DE3) , 表达纯化后用蛋 白质印迹 法( Western blot) 分析其抗原反 应性 。结果成功构建了重组质粒 pET21a- 19kD-ESAT6, 并在大肠埃希菌中获得高效表达 。SDS结果显示, 在相对分子质量( Mr) 约 29 ×103 处有表达条带。Western blot 结果表 明, 重组蛋 白19kD-ESAT6 与确诊的结核病 患者血清发生特异性免疫反应, 具有特异的抗原性 。本研究构建的结核分枝杆菌 19kD-ESAT6 融合蛋 白为结核 病血清学诊断试剂的开发提供了依据 。 关键词: 结核分枝杆菌; 19kD 脂蛋 白; 早期分泌抗原靶蛋 白6; 融合蛋 白 Cloning, expression, and purification of fusion proteins encoded by 19kD-ESAT6 in Mycobacterium tuberculosis 1 2 2 1 2 2 SHI Li , DING Yuan-Sheng , YANG Hua , LIU Yao-Ting , LIU Zhong-Hua , HU Zhong-Yi , 1 HUANG Rui 1. Department of Microbiology, Medical College of Soochow University, Suzhou 2 15123, China; 2. Shanghai Tuberculosis Key Laborarory, The Pulmonary Hospital Affiliated to Tongj i University, Shanghai 200433, China Abstract: The genes encoding 19kD lipoprotein and early secreting antigenic target-6 ( ESAT-6) were amplified from genome of the standard Mycobacterium tuberculosis H37Rv using polymerase chain reaction, and then cloned into the vector pMD18-T followed by subcloning into the expression vector pET-21a, respectively. Recombinant 19kD-ESAT6 was expressed in E. coli, and then purified by Ni-NTA. The antigenicity of the fusion protein was analyzed by Western blot analysis. The recombinant 19kD-ESAT6 plasmid was constructed successfully, and could be expressed efficiently