禽流感病毒h9亚型hn31株ns基因的克隆与序列分析 - 中国农学通报.pdf

中国农学通报 2012,28(02):53-56 Chinese Agricultural Science Bulletin 禽流感病毒H9亚型HN31株NS基因 的克隆与序列分析 1 2 1 1 1 1 1 黄宗梅 ，王忠田 ，张红英 ，王学兵 ，焦显芹 ，崔保安 ，李新生 1 2 （河南农业大学牧医工程学院，郑州450002 ；中国兽医药品监察所，北京100081) 摘 要：为克隆和分析禽流感病毒（H9 亚型）HN31 株的NS 基因的分子特征，通过RT-PCR 方法扩增其NS 基因，PCR 产物与载体pMD 19-T Vector 连接，转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选，调取阳性菌落，摇菌 过夜，提取质粒进行PCR 鉴定和酶切鉴定，送阳性重组质粒测序。结果显示RT-PCR 产物大小为 919 bp ，HN31 株的NS 基因长度为890 bp ；其与H6、H9 亚型的A 型流感病毒的亲缘关系比H5、H7、H3、 H 1亚型流感病毒更近。 关键词：H9 亚型禽流感病毒；NS 基因；克隆；序列分析 中图分类号：S852.65+95 文献标志码：A 论文编号：2011-2470 CloningandSequenceAnalysisofAvianInfluenzaVirusH9SubtypeHN31StrainNSGene 1 2 1 1 HuangZongmei,WangZhongtian,ZhangHongying,WangXuebing, JiaoXianqin,CuiBao’an,LiXinsheng1 1 1 1 (Animal Husbandry and Medical Engineering College ,Henan Agricultural University,Zhengzhou450002; 2China Institute of Veterinary Drugs Control,Beijing100081) Abstract: Inordertostudythemolecularcharacteristicsoftheavianinfluenzavirus(H9 subtypes)HN31 strain’s NS gene,itsnucleotideswereclonedintopMD19-TVectorbyRT-PCR.Theligationproductwas transformedintothecompetentE.coliDH5α.Thewhitecolonywasselected,andidentifiedbyPCRandEcoR Ⅰrestrictionenzymedigestion.Thepositiveplasmidwassequenced.TheresultsshowedthattheRT-PCR productwas919bp,HN31strain’sNS genelengthwas890bp.Throughthephylogeneticanalysis,thekinship withH6,H9subtypewascloserthanwithH5,H7,H3,H1subtypeofinfluenzavirus. Keywords:H9subtypeavianinfluenzavirus;NS gene;cloning;sequenceanalysis 0 引言