气肿疽梭菌胶体金诊断试纸条的研制 - 江苏农业科学.pdf

江苏农业科学　２０１６年第４４卷第１１期 — ２８３— 任春宇，姜丹丹，车　达，等．气肿疽梭菌胶体金诊断试纸条的研制［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（１１）：２８３－２８６． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．１１．０８５ 气肿疽梭菌胶体金诊断试纸条的研制 １ ２ １ １ １ １ １ 任春宇 ，姜丹丹 ，车　达 ，云巾宴 ，司　唯 ，段雪岩 ，金　鑫 （１．延边州畜牧总站／延边州动物疫病预防控制中心／延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 １３３０００； ２．大理大学公共卫生医学院，云南大理６７１０００） 　　摘要：为建立快速、准确、简便的检测气肿疽的胶体金免疫层析试纸条，以免疫层析法为指导，根据抗原－抗体的 特性，建立了不需要再加入任何检测试剂且快速简便的检测方法。结果表明，胶体金与该单抗的最佳结合量为 ３０ ｇ／ｍＬ，最佳 ｐＨ值为８．４，最佳ＮＣ膜为ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＨＦＢ１３５０２２０型。将纯化的气肿疽梭菌多抗及羊抗鼠ＩｇＧ分别以 μ １∶４和１∶８的稀释倍数喷于硝酸纤维素膜的Ｔ线和Ｃ线。对胶体金诊断试纸条进行验证，敏感度高，可检测到的最 ５ 低抗原量为１×１０ＣＦＵ／ｍＬ，特异性强、无假阳性与交叉反应现象、有较好的稳定性。本研究旨在建立快速、准确、简 便的检测气肿疽的胶体金免疫层析试纸条。 　　关键词：气肿疽梭菌；胶体金；免疫层析试纸条 ＋ 　　中图分类号：Ｓ８５５．１２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）１１－０２８３－０３ 　　气肿疽又称黑腿病或鸣疽，是由气肿疽梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ［１］ １　材料与方法 ｃｈａｕｖｏｅｉ）引起的反刍动物的急性、败血性传染病 。该菌属 细菌纲芽孢杆菌科梭菌属，是土壤中的专性厌氧菌，广泛分布 １．１　试验材料 ［２］ 气肿疽梭菌标准株 Ｃ ，购自于中国兽医药品监察所； 于自然界中，经常发现于牛和绵羊的肠内容物中 ，特别在 ５４－１ ［３－４］ 深部伤口的厌氧环境中 。该菌为革兰氏阳性棒状大杆 氯金酸（ＨＡｕＣｌ·４ＨＯ），购自科兴生物科技有限公司；柠檬 ４ ２ 菌，对进行疫苗接种的豚鼠腹腔渗出液做涂片观察，可发现该 酸三钠 ＣＨＮａＯ ·２ＨＯ，购自北京华力德科技有限公司； ６ ５ ３ ７ ２ 菌以单个形式存在，或几个细菌形成短链，可与呈长链的腐败 二氯二甲基硅烷（Ｓｉｇｍａ公司产品）；ＰＶＣ底板、玻璃纤维膜、 ［５］ 梭菌做出鉴别，这是形态上的主要区别之一 。在进行菌体 硝酸纤维素膜、ＭＡＸ线标签贴纸、色皮标签等，购自杭州隆基 培养时，需创造严格的厌氧环境，尤其是在固体培养中，当接 生物技术有限公司；ＢＳＡ，购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；样品垫及吸水 种于葡萄糖血液琼脂中时，形成半透明圆形菌落、 溶血环， β 垫，购自上海金标生物科技有限公司。 ［６］ 中心略凸起 。 １．２　单克隆抗体的制备、纯化及检测 该菌繁