温度和ph 对重组人血管内皮抑制素脱酰胺的影响 - 中国医药生物技术.pdf

88 中国医药生物技术 2010 年 4 月第 5 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2010, Vol. 5, No. 2 .DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.02.002 ·论著· 温度和 pH 对重组人血管内皮抑制素 脱酰胺的影响 解茹，张贵锋，高建萍，王明林，马润宇，苏志国 【摘要】 活性损失的降低具有重要意义。 目的 利用液质联用技术研究温度和 pH 对重组人血管内 蛋白质中 Asn 或 Gln 残基均可发生非酶 皮抑制素中天冬酰胺（Asn ）脱酰胺过程的影响。 催化的脱酰胺化，但 Gln 的脱酰胺速率远低于 方法 在不同的温度和 pH 值条件下，对重组人血管内皮 Asn[9] 。Asn 的脱酰胺包括两步反应，先形成五元 抑制素样品溶液进行孵化，酶解处理后利用液质联用技术识 环的琥珀酰亚胺，再发生环内酰胺键水解（图 1 ）。 别发生脱酰胺的多肽并测定其含量随样品放置温度和 pH 环内酰胺键断裂可发生在琥珀酰亚胺的任何一端 条件的变化。 并形成天冬氨酸（Asp ）和异天冬氨酸（isoAsp ）， 结果 质谱分析结果表明酶解产物中多肽 SVWHGSDPNGR 但最终蛋白中的脱酰胺产物多为 Asp ，其可能是 序列中的 Asn 发生了脱酰胺化，Asn 残基生成了天冬氨酸 Asp 作为天然氨基酸更能稳定存在于蛋白质结构 和异天冬氨酸残基，其他位置的 Asn 均未检测出明显的脱 中[10]，Asn 的脱酰胺速率受蛋白质的氨基酸序列及 酰胺化；实验获得了不同温度和 pH 条件下重组人血管内 三维结构、储存温度和 pH 值、离子种类和离子强 皮抑制素中 Asn 脱酰胺化的速率及动力学常数；Asn 脱酰 度等因素影响[9-11] 。在脱酰胺位点识别方面，离子 胺过程随着温度和溶液 pH 值的升高，Asn 脱酰胺速率 交换色谱因分离含 Asp 与 IsoAsp 多肽存在一定 上升。 难度导致其用于脱酰胺化研究存在局限性[12] 。羧酸 甲基转移酶法分析 Asn 脱酰胺位点具有特征性强 结论 重组人血管内皮抑制素中天冬酰胺的脱酰胺过程受 等优点，但检测过程繁琐且需要使用难以获得的工 储存温度和 pH 值影响，研究药用蛋白质在不同条件下的 脱酰胺过程对于筛选合适的储存条件、减少活性损失具有重 要意义。 【关键词】 血管抑制素类； 天冬酰胺； 肽类；色谱 法，高压液相 中国医药生物技术, 2010, 5(2):88-93 蛋白质脱酰胺化是指天冬酰胺（Asn ）或谷酰 胺（Gln ）残基侧链发生脱酰胺反应形成天冬氨酸 Asn 、Asu 、Asp 、isoAsp 理论分子量按单一同位素计算 或谷氨酸的过程。生物体内脱酰胺化是一种重要的 The oretical masses of Asn, Asu, Asp and isoAsp residues are calculated 蛋白质翻译后修饰，主要在脱酰胺酶的催化作用下 based on monoisotope. 完成[1-2] ；脱酰胺化常作为许多生物学过程的分子钟 图 1 天冬酰胺经由琥珀酰亚胺生成天冬氨酸和异天冬氨 酸的反应机理[3] （molecular clock ）影响蛋白质的合成和代谢的周期 Figure 1 The me