lab-8细菌的快速测定.ppt

实验八　细菌的鉴定（BBL半自动鉴定系统） 一、教学要求 了解不同的微生物快速鉴定方法及应用 初步掌握细菌自动鉴定系统 （BBL CRYSTAL）的操作技术 二、实验原理 1、 Miniaturized Biochemical Assays Bacteria can be identified by specific biochemical products they produce during growth. Biochemical and enzymatic reactions Miniaturized biochemical assays test for these specific products 2、Immunoassays 血清学反应（Serological reactions）Agglutination reactions、Precipitation reactions 免疫标记（immunolabel) Radioimmunoassays (RIA) Fluorescent immunoassays (FIA) Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) Chemiluminesent Immunoassay(CLIA)、 Time-resolved fluorescent immunoassays（TRFIA） Immunogold labelling ELISA（enzyme linked immunosorbent assay） The ELISA can be used to detect the presence of antigens that are recognized by an antibody, or it can be used to test for antibodies that recognize an antigen. Sandwich ELISA Immunogold labelling techiques 斑点免疫金渗滤法 胶体金标记免疫层析法 3、Nucleic acid based assay DNA hybridization followed by detection with Dot blot assay Fluorescence or Chemiluminesence Polymerase Chain Reaction (PCR) followed by detection with Gel electrophoresis Fluorescence or Chemiluminesence New assay formats under development 三 材料与器材 菌种：待测的分纯菌株 试剂：无菌水，液体石腊，灭菌滴管等 API 20 E 系统 四 操作步骤 (BBL CRYSTAL—细菌自动鉴定系统 ) 1、配制菌液 挑取单个菌落，在肉汤管（厂商已提供）中混匀，调节好菌液浓度（ 0.5-1.0麦氏浊度 ）。 2、接种 取出盛液盒,配制好的菌悬液直接倒入头部，轻轻地来回颠倒盛液盒，使菌液均匀充满每一孔，并让多余的菌液回到头部。撕开鉴定板的密封包装，鉴定板，其泡沫部位对应盛液盒的头部，均匀下压，使鉴定板和盛液盒合紧。 3、培养 翻转鉴定板（标签向下）放鉴定板入配套托盘内，放入非CO2 35-37OC，湿度40-60%的孵育箱孵育3.0h。 五 注意事项 配制菌悬液时一定要按操作要求调节好浓度。 六 思考题 采用细菌自动鉴定系统 （BBL CRYSTAL）进行细菌鉴定有何优缺点 ？ * * API- Identification Kits Gram-negative bacteria Staphylococci Automated Identification Systems VITEK系列全自动微生物分析系统（biosMerieumx） BBL CrystalTM半自动/自动细菌鉴定系统（BD） 鉴定板，比浊仪，微生物鉴定专家数据分析系统，自动判读仪(Autoreader) ? 1、? 鉴定版（6类） NH 奈瑟氏/嗜血杆菌 3.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育4小时 GP 革兰氏阳性菌 0.5麦氏浊度 35～37℃ 孵育18～24小时 RGP 快速革兰氏阳性菌 2.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育4小时 ANR 厌氧菌 4.0-5.0麦氏浊度