“光合1号冶中华绒螯蟹微卫星富集文库的构建与多态性标记的筛选.PDF

第28卷第3期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol郾28 No郾3 20 13 年6 月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY June2 0 13 文章编号:2095-1388(2013)03-0230-06 “光合1号冶 中华绒螯蟹微卫星富集文库的 构建与多态性标记的筛选 1、2 2 1 2 1、2 2 2 田盛君 , 李晓东 , 姜玉声 , 刘胥 , 杨红威 , 原振政 , 郑岩 (1. 大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁 大连 116023;2. 盘锦光合蟹业有限公司研发中心, 辽宁盘锦 124000) 摘要:采用磁珠富集法 (Fast isolation by AFLP sequences containing repeats, FIASCO) 构建 “光合 1号冶 新 品种中华绒螯蟹Eriocheir sinensis基因组微卫星文库。 用PCR法对225个单菌落进行鉴定, 共获得168个阳 性克隆, 测序发现有94个含有微卫星座位, 其准确率为55郾95%, 其中单元重复次数为5 ~10 的序列占 34郾04%, 重复次数为10~20 的序列占20郾21%, 重复次数大于20 的序列占45郾75%, 重复次数最高达到 92次; 完美型微卫星座位69个 (占73郾40%), 非完美型微卫星座位 17个 (占18郾09%), 混合型微卫星 座位8 个 (占8郾51%); 根据微卫星侧翼序列设计并合成 53 对引物, 检测结果显示, 有 31 对 (占 58郾50%) 引物能够扩增出特异性条带; 选择其中14对多态性良好的引物用于中华绒螯蟹辽河野生群体的 遗传多样性分析, 共检测到148个等位基因, 单个位点等位基因数为7~13个, 平均为10郾6个, 观测杂合 度为0郾214 3~0郾6667, 期望杂合度为0郾8254 ~0郾910 1, 多态性信息含量为0郾766 3~0郾8654。 关键词:中华绒螯蟹; 微卫星文库; 分子标记; 遗传分析 中图分类号: S917郾4摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 中华绒螯蟹Eriocheir sinensis 又名河蟹、 大闸 究与应用。本研究中, 作者采用磁珠富集法 (Fast 蟹, 隶属于十足目、 方蟹科、 绒螯蟹属, 为中国重 isolation by AFLP sequences containing repeats, FI鄄 [1] [14] 要的经济蟹类 。 随着大规模养殖业的发展, 中 ASCO) 构建中华绒螯蟹 “光合 1号冶 的微卫星 华绒螯蟹种质退化现象明显, 遗传改良及良种培育 文库, 并筛选多态性微卫星标记, 旨在丰富中华绒 [2] 工作已引起关注 。 盘锦光合蟹业有限公司于 螯蟹分子标记数量, 同时也为寻找 “光合 1 号冶 2000年开始中华绒螯蟹 “光合 1号冶 良种选育工 中华绒螯蟹特异标记奠定基础。 作,2011年通过了国家级良种审定委员会审定, 1摇 材料与方法 并由农业部发布了建议在全国推广养殖的新品种公 告。 水产动物新品种选育需要准确的亲缘关系鉴定 1郾1摇 材料 [3] 及遗传分析技术 。 由于蟹类具有蜕壳习性, 通 常的体外物理标记很难应用于实际工作, 借助现代