- 1、本文档共11页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
中国生命科学论坛精华--蛋白质实验-生物谷
中国生命科学论坛精华之—— 蛋白质实验(1)
蛋白质的研究是现在生物学领域的一个主要的研究方向。现在我们把来自中国生命科学论坛的
部分精华帖子整理出来,与大家共同讨论。希望对大家都有所帮助。同时欢迎您来到
。
一、蛋白质提取
1、植物组织蛋白质提取方法 (summer)
1、根据样品重量(1g 样品加入3.5ml 提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
2 、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4 、提取上清液,样品制备完成。
蛋白质提取液:300ml
1、1M tris -HCl (PH8 ) 45ml
2 、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone )6g
这种方法针对SDS,垂直板电泳!
2 、植物组织蛋白质提取方法 (summer)
三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2 、加入样品体积3 倍的提取液在-20 ℃的条件下过夜,然后离心(4 ℃8000rpm 以上1 小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07% 的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4 ℃8000rpm 以上1 小时),然
后真空干燥沉淀,备用。
4 、上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm 以
上 1 小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4 ℃待用。
5、用Brandford 法定量蛋白 (见第二部分),然后可分装放入-80℃备用。
药品:
提取液:含 10%TCA 和0.07% 的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M 的
DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带
会减少!
3 、肠黏膜组织蛋白质提取方法 (newinbio )
目的:WESTERN BLOT 检测凋亡相关蛋白的表达
应用TRIPURE 提取蛋白质步骤:
含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml 每 1mlTRIPURE 用量)
倒转混匀,置室温 10min
离心:12000 g,10min,4 度,弃上清
加入0.3M 盐酸胍/95 %乙醇:(2ml 每 1mlTRIPURE 用量)
振荡,置室温20min
离心: 7500g ,5 min ,4 度,弃上清
重复0.3M 盐酸胍/95 %乙醇步2 次
第 1 页 共 10 页
中国生命科学论坛精华之—— 蛋白质实验(1)
沉淀中加入 100%乙醇 2ml
充分振荡混匀,置室温20 min
离心: 7500g ,5min ,4 度,弃上清吹干沉淀
1%SDS 溶解沉淀
离心:10000g,10min,4 度
取上清-20 度保存(或可直接用于WESTERN BLOT )
存在的问题:加入 1%SDS 后沉淀不溶解,还是很大的一块,4 度离心后又多了白色沉定,SDS 结晶?
测浓度,含量才 1mg/ml 左右。
解决:提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加2X BUFFER ,然后煮5-10 分钟,效果很
好的。
4 、植物蛋白提取 (yog )
Protein extraction buffer (Camiolo buffer):
100 ml= (0.075M Potassium Acetate) 0.736g
(0.3M) NaCl 1.753g
(0.1M) L-arginine basic salt 1.742g
(0.01M) EDTA-HCl 0.292g
(0.25%) Triton X- 100 250. ul
up to 100 ml with dH20. pH 7.4. Then 0.2 um filter.
步骤:
1. Freeze tissue in liquid nitrogen.
2. Rinse in PBS then mince.
3. Add 1 ml Camiolo extraction buffer per 100 mg of tissue.
4. Homogenize for 1 minute at 4C.
5.
您可能关注的文档
- 不同电极结构下介质阻挡放电的特性研究.PDF
- 不同教学方法透过篮球竞赛活动对高中学生批判思考的影响.PDF
- 不干胶材料的模切知识(上).DOC
- 不生病的生活全美首席胃肠科医师的健康秘诀-任兆璋修女林美智老师.PPT
- 不同研磨时间对咖啡感官风味的影响-中国农学通报.PDF
- 不确定边界区域间方向关系建模方法-北京邮电大学学报.PDF
- 不论发生什么,我总会跟你在一起!.PPT
- 与纹理无关的散焦测距方法的研究-应用科技-哈尔滨工程大学.PDF
- 专业教师姓名100~102学年度指导专题题目光纤光栅解析系统之塩度.PDF
- 专业消费级产品组.DOC
- 《GB/T 32151.42-2024温室气体排放核算与报告要求 第42部分:铜冶炼企业》.pdf
- GB/T 32151.42-2024温室气体排放核算与报告要求 第42部分:铜冶炼企业.pdf
- GB/T 38048.6-2024表面清洁器具 第6部分:家用和类似用途湿式硬地面清洁器具 性能测试方法.pdf
- 中国国家标准 GB/T 38048.6-2024表面清洁器具 第6部分:家用和类似用途湿式硬地面清洁器具 性能测试方法.pdf
- 《GB/T 38048.6-2024表面清洁器具 第6部分:家用和类似用途湿式硬地面清洁器具 性能测试方法》.pdf
- 《GB/T 18238.2-2024网络安全技术 杂凑函数 第2部分:采用分组密码的杂凑函数》.pdf
- GB/T 18238.2-2024网络安全技术 杂凑函数 第2部分:采用分组密码的杂凑函数.pdf
- 《GB/T 17215.686-2024电测量数据交换 DLMS/COSEM组件 第86部分:社区网络高速PLCISO/IEC 12139-1配置》.pdf
- GB/T 13542.4-2024电气绝缘用薄膜 第4部分:聚酯薄膜.pdf
- 《GB/T 13542.4-2024电气绝缘用薄膜 第4部分:聚酯薄膜》.pdf
文档评论(0)