从绿色植物中提取色素分离薄层色谱和柱层析法.ppt

绿色植物中色素的 提取和分离 (薄层色谱和柱色谱); 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一，它的分离效果比分馏、重结晶等一般的物理方法好，适用于少量和微量物质的分离。这一方法已在化学、生物学和医学中得到了普遍应用，广泛用于天然产物的分离和提纯。;绿色植物中色素的提取和分离;一、实验目的 ;二、实验原理 ;叶绿素a(R=CH3) 叶绿素b(R=CHO);吸附色谱是以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质从溶液中吸附到它的表面上；然后用溶剂洗脱或展开，利用不同物质在吸附剂和溶剂之间分布情况不同而得到分开。如柱色谱和薄层色谱。 分配色谱是利用混合物的组分在2种互不相溶的液体中分布情况不同而得到分离。这样的分离不经过吸附程序，仅由溶剂的萃取来完成，相当于一种连续性溶剂萃取方法。;薄层色谱 ;吸附剂 薄层色谱中常用的吸附剂是硅胶和氧化铝。其中硅胶分为硅胶G(含有煅石膏粘合剂)、硅胶H(不含粘合剂)、硅胶HF254(含荧光物质)。氧化铝也根据含粘合剂或荧光物质分为氧化铝G、氧化铝G F254、氧化铝HF254。;1：薄层板为什么要活化？ 2：在混合物的薄层色谱中，如何定性的判定各组分在薄层上的位置。; Rf值(比迁移值) 比迁移值是表示色谱图上斑点相对位置的一个数值。 各种物质的Rf值因其结构、吸附剂种类、展开剂、温度等不同而异。当上述条件固定时，对于一个物质来说比迁移值(Rf值)是一个特性常数，可以用来鉴别不同化合物，还可用于物质的分离和定量测定。 ;柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。如为无色物质，可用紫外光照射，收集会发出荧光的组分；否则就要采取分段收集洗提液，再分别进行鉴定。;柱色谱原理：;吸附剂 常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。;溶剂 溶剂分为溶解样品的溶剂和洗脱剂。选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。通常是先将要分离的样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中。然后用稍大极性的溶剂使各组分在柱中形成若干谱带。再用极性更大的溶剂洗脱被吸附的物质。为了提高洗脱效果，有时也使用混合溶剂。;三、试剂及仪器;四、实验步骤;四、实验步骤;四、实验步骤;各洗脱剂对应的色带;五、注意事项