人胰腺癌细胞与组织Jab1、Smad4蛋白表达及意义.pdfVIP

山东医药 2012年第 52卷第 l7期 人胰腺癌细胞与组织 Jabl、Smad4蛋 白 表达及意义 李 军 ，郑 勇 ，田德安 ，李思源 ，孙 侃 (1石河子大学医学院第一附属医院，新疆石河子832000；2华中科技大学 同济医学院同济医院；3石河子大学医学院组胚教研室) 摘要：目的 检测人胰腺癌 (Pc)细胞及组织中抑癌基因Smad4及原癌基因Jun激活区域一连接蛋白1(Jab1) 的蛋白及mRNA表达，探讨其在Pc发病中的作用。方法 采用Westernblotting技术检测人Pc组织、癌旁组织及 人Pc细胞系(PANC一1、AsPC一1、BxPC~)中的Smad4、Jabl蛋 白表达；RT-PCR法检测人PC组织、癌旁组织的Smad4 mRNA表达。结果 在人Pc组织中，Smad4蛋白无表达或明显低于癌旁组织，Jabl蛋白表达明显高于癌旁组织(P 0．01或 0．05)；两组织中的Smad4mRNA表达无统计学差异。在 3种人PC细胞系中，BxPC~细胞 Smad4蛋 白 表达阴性、Jabl蛋白表达强阳性，PANC一1及AsPC一1细胞的Smad4蛋 白低表达 、Jabl蛋白高表达。结论 在人Pc 组织及细胞中，Smad4蛋白低表达或不表达、Jabl蛋白高表达；提示Smad4蛋白不稳定可能与Jabl蛋白水平相关 ， 其可能在PC发病机制中起重要作用。 关键词：胰腺肿瘤；Smad4；Jabl 中图分类号：R735．9 文献标志码：A 文章编号：1002~66X(2012)l7 040一D2 胰腺癌(PC)是消化系恶性程度最高、预后最差 含 10％小牛血清及 1％青霉素／链霉素的 RPMI一 的肿瘤，在肿瘤发病中居第 10位…，其病死率居第 1640培养基，在37oC、5％ CO 培养箱中培养。细 4位_j’。PC是一个多基因、多步骤的发展过程 ，涉 胞生长至80％一90％汇合时传代，吸出培养基，用 及多个原癌基因和抑癌基因突变。Hahn等 报道， PBS清洗细胞，0．25％胰蛋 白酶短暂消化细胞；弃去 约50％的PC存在 Smad4／DPC4丢失或失活，故抑 胰蛋白酶，在倒置显微镜下观察细胞漂浮后，加入相 癌基因Smad4／DPCA与Pc的发病机制密切相关。近 应的原培养基，吹打悬浮细胞成细胞悬液后，传代备 年研究表明，原癌基因Jun激活区域一连接蛋 白1 用或冻存 。 (Jab1)涉及Smad4蛋 白降解，可引起 Smad4蛋 白不 1．2．2 Smad4、Jabl蛋 白检测 采用 Westernblot． 稳定 J，提示 Jabl可能在肿瘤的发生、发展 中起重要 ting法检测人 PC组织、癌旁组织及人 PC细胞系中 作用。目前，对PC细胞与组织Jabl、Smad4蛋 白表达 的Smad4、Jabl蛋 白表达 。用 Bio—Rad蛋 白分析法 及其在PC发病中的作用机制尚不明确。2010～2012 检测并平衡PC组织或细胞中提取的蛋 白浓度。制 年，我们进行了相关研究。现报告如下。 备 SDS．聚丙烯凝胶、上样样品及上样 ；电泳、转膜、 1 材料与方法 封闭后，用一抗 Jabl(兔抗 Jabl多克隆抗体)及 1．1 材料 人PC组织、癌旁组织 (正常胰腺组织) Samd4(小 鼠抗 Smad4单克隆抗体)4oC孵育过夜。 冲洗一抗；二抗辣根过氧化物酶偶联的羊抗兔及羊 取 自石河子大学医学院第一附属医院病理科，均经 冰冻及石蜡包埋。PC病理诊断至少经两位不知晓 抗小鼠IgG抗体室温孵育 1h；冲洗二抗后显影，进 行结果分析。 患者病情的病理学医师阅片后判定并提供。3种人 1．2．3 Smad4mRNA检测 采用 RT—PCR法检测 PC细胞系 PANC．1、AsPC．1、BxPC一3