大腹园蛛次壶腹腺丝的表达.PDF

杨子江 等/大腹园蛛次壶腹腺丝的表达 1323 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology September 25, 2013, 29(9): 1323−1331 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 大腹园蛛次壶腹腺丝的表达 杨子江，陈格飞，孟清 东华大学生物科学与技术研究所，上海 201620 杨子江, 陈格飞, 孟清. 大腹园蛛次壶腹腺丝的表达. 生物工程学报, 2013, 29(9): 1323−1331. Yang ZJ, Chen GF, Meng Q. Expression of Araneus ventricosus minor ampullate spidroin. Chin J Biotech, 2013, 29(9): 1323−1331. 摘 要: 基于大腹园蛛次壶腹腺丝Minor Ampullate Spidroin 全长编码基因必威体育精装版报道，研究了该基因的表达。 利用PCR 扩增该基因重复区一段长 1 348 bp 的片段P1 ，融合his-tag 标签，构建酵母表达载体，在毕赤酵母菌 GS115 进行表达。同时构建大肠杆菌表达载体，在大肠杆菌 BL21(DE3) 中进行表达。SDS和 Western blotting 检测结果表明，P1 在两种表达系统中均可实现表达。研究结果显示：P1 在 GS115 中的表达经优化后 产量、产率有较大提高，且远高于BL21(DE3) 中的表达，相应的纯化效率GS115 也远高于对照BL21(DE3) 的 表达。研究表明酵母表达系统更适合重复度高、且富含Gly/Ala 的天然蛛丝蛋白基因的表达，为表达全长天然 MiSp 编码序列提供前期实验基础，也为大规模蛛丝蛋白的重组表达建立了平台。 关键词: 次壶腹腺丝蛋白，毕赤酵母表达系统，大肠杆菌表达系统 Expression of Araneus ventricosus minor ampullate spidroin Zijiang Yang, Gefei Chen, and Qing Meng Institute of Biological Science and Biotechnology, Donghua University, Shanghai 201620, China Abstract: A repetitive DNA fragment, named P1, was amplified by PCR with the full-length Minor Ampullate Spidroin gene sequence of Araneus ventricosus as template. P1 was ligated with pPic3.5 and PKT expression vectors and transferred into GS115 and BL21(DE3) competence cells, respectively. SDSand Western blot were used to analyze the Received: January 20, 2013; Accepted: March 22, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2006AA03Z451), Science and Technology Commission of Sh