原代小鼠肝实质细胞三维培养 - 中国科学.pdf

简 报 第45 卷 第 11 期 2000 年6 月 原代小鼠肝实质细胞三维培养 何继满 丰美福* ( 中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室, 北京100080. * 联系人, Email: fengmf@panda.ioz.ac.cn) 摘要 小鼠原代肝实质细胞和同种小鼠肝成纤维细胞在无血清混合共培养条件下, 形成了复杂的 三维结构, 而且维持良好的功能状态: 白蛋白分泌水平在第7 天时仍维持 10 g/106 细胞以上, 尿 素合成水平平均达25 g/106 细胞. 通过无血清的培养方式, 可避开血清中复杂成分的作用, 研究 肝成纤维细胞对肝实质细胞的活性 功能和三维结构形成的作用. 表明间质成分对肝实质细胞活 性和功能的影响中, 成纤维细胞和肝实质细胞之间直接黏附作用的重要性. 关键词 肝实质细胞 原代培养 三维结构 肝脏是哺乳动物体内能量与物质的代谢中心, 执行着许多重要的功能, 如毒物的分解 尿素的合成 制造血浆中除几种免疫球蛋白之外的所有血浆蛋白质等. 肝脏的这些功能主要 由肝实质细胞完成. 肝实质细胞在体内有着顽强的代偿功能, 但在体外培养的情况下, 却完全 [1,2] 相反,细胞不易成活, 成活了一定时间却很少表达功能或只微弱地表达部分功能 . 肝实质细 胞的原代培养方法一直没有很好地解决. 自 Seglen[3]于 1976 年报道了两步酶灌注法后, 肝实 质细胞的原代培养如细胞因子的选择 基质成分的包被 培养方式的改进(如夹层培养和三维 培养)等取得了一些进展, 其中肝实质细胞的三维培养越来越为人们所重视. Peshwa [4]接种大 鼠原代肝实质细胞于带正电荷的聚苯乙烯培养板上, 使肝实质细胞成团而形成三维结构, 其 细胞白蛋白分泌在培养 6 d 后, 还能维持较好的水平. Koide[5] 从鼠肝网硬蛋白纤维(liver reticulin fibers) 中提取蛋白多糖和原代大鼠肝实质细胞共培养, 得到了三维团聚物并维持一定 的白蛋白合成. 肝实质细胞的三维培养为生理 药理等方面的研究提供了理想的模型, 特别 是在人工肝器官的应用上有着重要意义. 本文利用小鼠原代肝实质细胞与从小鼠肝分离的第 3 代成纤维细胞在无血清条件下混合培养, 成功地培养出复杂的三维结构物, 并使白蛋白分泌 在第7 天时仍能平均达到10 g/106 细胞以上, 尿素合成水平平均达25 g/106 细胞. 通过无血 清培养, 排除了血清中复杂成分的作用, 有利于研究间质成分对肝实质细胞的作用. 1 材料和方法 (1) 材料. 小鼠: 昆明白, 体重 18 24 g, 出生后35 45 d, 自由饮水和取食, 中国科学 院动物研究所提供. 胶原酶 型为 Sigma 公司产品. 0.4%台盼蓝溶液: 20 mg 台盼蓝(Chroma 进口分装)溶于5 mL PBS 中, 0.45 m 过滤; 活细胞排斥台盼蓝染料, 通过统计得到细胞的成 活率. 2%锇酸(Osmium tetraside)为Joohnson Matt