基因诊断在法医学中的应用镰状细胞贫血的基因诊断一.ppt

点多态性 表现为DNA链中发生单碱基突变，且突变导致一个原有酶切位点的丢失或形成一个新的酶切位点。这类多态性实际是双态的，即有或无酶切位点。据此，样品DNA经特定内切酶消化或Southern印迹杂交即可诊断某些疾病。 2. 序列多态性 DNA链内发生较大片段的缺失、重复、插入等变异。结果，内切酶位点本身碱基序列虽未改变，但原有内切酶位点在基因组中的相对位置改变了从而导致RFLP。也可用Southern印迹杂交诊断相关疾病。 基因芯片(Gene chip, DNA chip),又称为DNA微阵列(DNA Microarray)，是指固定在载体上的高密度DNA微点阵。具体地说就是将已知DNA片段或cDNA片段作为探针，紧密有序地排列固定于支持物（多聚赖氨酸硅胶）上，然后与荧光标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子杂交信号的强度，获取样品分子的数量和序列信息。 四、基因芯片 基因芯片的工作原理与经典的核酸分子杂交方法（southern?、northern）是一致的，都是应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交，通过随后的信号检测进行定性与定量分析，基因芯片在一微小的基片（硅片、玻片、塑料片等）表面集成了大量的分子识别探针，能够在同一时间内平行分析大量的基因，进行大信息量的筛选与检测分析。 基因芯片主要技术流程包括：芯片的设计与制备；靶基因的标记；芯片杂交与杂交信号检测。 基因芯片或微阵列是近年发展起来的分子生物学研究工具。在 1 平方厘米的芯片上可以同时分析几百至数万个基因，具有高通量、快速获取有关生物学信息的特点。目前基因芯片主要用于科研，要从实验室研究推向临床应用还有一系列问题需要解决。如提高特异性、简化操作、降低成本等。 第三节 基因诊断的应用 一、遗传性疾病的诊断 二、感染性疾病基因诊断 三、基因诊断在法医学中的应用 镰状细胞贫血的基因诊断 一、遗传性疾病的诊断 血红蛋白(hemoglobin, Hb) 镰刀形红细胞贫血（sickle cell anemia） 镰状细胞贫血的基因诊断 Pro Glu Glu CCT GAG GAG HbA Pro Val Glu CCT GTG GAG HbS MstII MstII MstII CCTNAGG 1.1kb 0.2kb MstII MstII 1.3kb 5 6 7 HbA:2053bp 点突变,发生在限制性内切酶位点上 Southern blot 检测镰状细胞贫血 制备血液DNA MstII消化 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜 与标记的珠蛋白DNA杂交 放射自显影 PCR扩增检测 PCR扩增珠蛋白基因 MstII消化 琼脂糖电泳EB染色 纯合子 杂合子 1.3Kb 1.1Kb 镰状细胞贫血症患者的血样本DNA经MstII（识别序列CCTGAGG）酶切后电泳检测。 294 191 103 bp SS AA AS PCR扩增检测结果 二、感染性疾病基因诊断 感染性疾病由病原微生物引起，致病的病原微生物主要有病毒、细菌、衣原体、支原体和螺旋体等。这些病原体的传统检测方法通常采用形态学检查，体外培养和免疫学试验。但对某些难以培养的病原体，抗原抗体检测不能判断体内病原体 DNA 或 RNA的 复制情况，或存在检测灵敏度低等问题。自聚合酶链反应（ PCR ）技术问世以来，基因诊断技术作为病原体检测的新方法得到突飞猛进的发展 实时荧光定量 PCR （ Real Time Flourescence quantitative PCR, FQ—PCR ） 病原体基因诊断的主要技术方法 * 第十四章 基因诊断和基因治疗 表型的改变是由基因异常造成的 表型的改变是由基因异常造成的 讲授内容及要求 一、基因诊断的基本概念 二、基因诊断的基本技术 三、基因诊断的应用 四、基因治疗:概念、方式、 程序、应用 第一节 基因诊断基本概念和流程 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断 表型的改变是由基因异常造成的 基因的改变是引起疾病的根本原因 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为