光度测定法.PDF

光度測定法 ‧光譜學基本原理 ‧螢光光度計 ‧原子吸光光度計 1 ‧光譜學基本原理 –光的特性與種類 –光譜圖的由來與原理 –光電光度計 –儀器架構 –實驗設計流程 2 1 光的特性與種類 8 光的速度(C)為定值(3 x 10 m/sec)，光速為 光的波長與其頻率之乘積 ‧光波分別為： γ-輻射線(0.0005~0.14 nm)、X光(0.01~10 nm)、 紫外光(200~400 nm)、可見光(400~780 nm)、 紅外線(780~3,000 nm) 、微波(0.75~3.75 mm)、 核磁共振(0.6~10 m) 、無線電波(0.1~100 m) 3 ‧光線的頻率越高對人體皮膚與組織間的傷害 程度越大， ‧紫外光、X光與輻射線等光線可列為易對人 體造成傷害的危險光，詳細關係如表2-1。 4 2 5 光譜圖的由來與原理 ‧由來 當連續光通過不同物質時，該物質對光線 會有不同程度的吸收或透光度，進而產生 不同高低的波峰圖形，此圖形即稱為光譜 圖。 光譜圖中以波長與吸光值來分別表示X軸與 Y軸單位，此圖稱為吸收光譜圖 (absorption spectrum)。 6 3 7 在其中分別可看出最大吸收波長與最小吸 收波長，另外可發現在一波長範圍內亦有 多個吸收波長 物質對光的吸收並非只發生在一個波長 下，通常為多個波長 為了減少其他物質的吸收干擾以提高實驗 值的精準度，在試驗前可依據實驗試藥與 儀器的需求來選用最適吸收波長來分析所 需偵測的物質。 8 4 ‧原理 光譜學的基本原理主要依據藍伯與比耳定 律來表示。 當連續光通過一溶液時，只有某一波長的 光被吸收，此時吸光值的大小在藍伯定律 (Lambert｀s law)中主要與盛裝溶液的厚 度有關，即在一厚度範圍下，溶液的厚度 愈大，吸光值愈高； 比耳定律(Beer＇s law)中吸光值的大小主 要與盛裝溶液的濃度有關，在一濃度範圍 下，溶液的濃度愈大，吸光值愈高。 9 – 其個別公式表示如下： »藍伯定律： log I /I ＝k x b 0 » 比耳定律：log I /I ＝k x c