基于聚苯乙烯微球放大的凝血酶化学发光检测新技术.PDF

中国科学: 化学 2011 年 第41 卷 第1 期: 1 ~ 7 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 论 文 基于聚苯乙烯微球放大的凝血酶化学发光 检测新技术 路璐, 康宏艳, 曹志娟, 刘彩云, 卢建忠* 复旦大学药学院, 上海 201203 *通讯作者, e-mail: jzlu@ 收稿日期: 2011-03-04; 接受日期: 2011-03-20 doi: 10.1360/032010-128 摘要 本文以羧基96 孔板为分离载体, 核酸适配体作为分子特异性识别元件, 聚苯乙烯微 关键词 球作为放大载体, 辣根过氧化物酶为标记物, 构建了化学发光(CL)高灵敏度凝血酶检测新 核酸适配体 聚苯乙烯微球 技术. 实验结果表明: 该放大技术不但灵敏度高, 且抗干扰能力强, 其他蛋白质如IgG 、IgM 、 凝血酶 IgA 、IgE 、IFN 均无明显干扰. 聚苯乙烯微球放大体系中凝血酶的线性范围为7.8~250 pmol/L, 化学发光 最低检测浓度可达3.9 pmol/L; 而不放大检测技术的线性范围为0.94~30 nmol/L, 最低检测浓 度为0.46 nmol/L, 放大体系将检测灵敏度提高 100 多倍. 综合而言, 基于适配体识别和聚苯 乙烯微球放大的凝血酶CL 检测新技术具有通量大、简单快速和灵敏度高的特点, 有望在凝 血酶高通量检测领域获得应用. 1 引言 物和金属离子等. 近年来识别不同疾病相关蛋白质 分子的适配体传感器受到研究者的极大关注[10~13], [1] 蛋白质的检测方法很多 , 如最早的浊度法、凯 如比色法[14] 、荧光检测法[15] 、电化学法[16~18]等. 常用 氏定氮法、吸光光度法[2] 、染料结合法、荧光光度 的标记物有酶[19~21] 、荧光染料[22] 、纳米粒子[23, 24]等, 法[3] [4, 5] [6] 、共振瑞利散射法 、高效液相色谱法 、毛细 这些检测技术已广泛应用在基因疾病的诊断和治疗、 管电泳分析法等. 此外, 选择性特异性好的酶联免疫 环境监测、食品安全等领域. (ELISA)[7] 、放射免疫(RIA)[8] 、荧光免疫方法(FIA)[9] 化学发光(CL)分析技术灵敏度高、仪器简单、线 等也得到了非常广泛的应用. 然而并非所有的蛋白 性范围宽, 已成为现代痕量分析领域应用较多的方 质分子都能得到与之相适应的高特异性抗体, 且存 法之一[25, 26]. 本课题组曾报道了一种基于聚苯乙烯 在抗体对外界环境敏感、易失活、保存期短的不足. 微球作为放大载体的高灵敏度 DNA 化学发光检测技 适配体是指利用指数富集的配体系统进化 术[27]. 聚苯乙烯微球作为一种高分子生物载体, 具有 (SELEX)技术, 从人工合成的寡核苷酸文库中筛选获