VP-A-010-00红霉素中二氯甲烷残留检验方法验证方案0112.doc

红霉素中二氯甲烷和三氯甲烷残留检验方法验证报告 Validation Report of Methylene Chloride and Chloroform Residue Test Method in Erythromycin 验证方案编号：VP-A-012-00 版 本 号：00 目 录 1.概述 2 1.1产品概述 2 1.1.1产品名称 2 1.1.2产品化学结构式 2 1.2方法建立概述 2 2.检测方法 3 2.1溶剂残留接受标准 3 2.2 方法描述 3 2.2.1 仪器 3 2.2.2 试剂 3 2.2.3 溶液配制 3 2.2.4 色谱条件 3 2.2.5 系统适应性 4 2.2.6 计算 4 3 验证内容 5 3.1 试剂及仪器 5 A．检测用试剂 5 B．样品 5 C．仪器和设备 5 3.2 验证溶液配制 5 3.3 操作 6 3.4 验证项目 6 3.4.1．精密度 6 3.4.2．线性 8 3.4.3 回收率 8 3.4.4 定量限、检测限 9 3.4.5．耐用性 10 4.验证结果评定与结论 11 1.概述 1.1产品概述 1.1.1产品名称 中文名：红霉素 英文名：ERYTHROMYCIN 1.1.2产品化学结构式 分子式：C37H67NO13 结构式： 1.2方法建立概述 我公司生产的红霉素在生产过程中使用了二氯甲烷，该溶剂的测定方法按照VP-A-004-00进行了验证，但是由于使用了FID检测器，对二氯甲烷的灵敏度不高，因此验证结并不是很理想，特别是当二氯甲烷的浓 度较低时，准确度难以保证，该方法使用电子捕获检测器（ECD）对二氯甲烷的检测重新验证。试剂二氯甲烷中含有少量三氯甲烷，因此同时对三氯甲烷也需要检测监控。色谱系统和条件参照美国药典（USP）467专论和欧洲药典（Ph.Eur）.1溶剂残留接受标准 溶剂 二氯甲烷 三氯甲烷 限度 600ppm 60ppm 2.2 方法描述 2.2.1 仪器 万分之一分析天平 Agilent6890N GC with 7694E Headspace 2.2.2 试剂 DMSO(HPLC)；二氯甲烷(AR)；三氯甲烷（AR） 2.2.3 溶液配制 —样品溶液：取样品约0.50g，精密称定，用DMSO溶解，并稀释至50ml； —溶剂溶液：取二氯甲烷约3.0g，三氯甲烷约0.3g，精密称定，用DMSO溶解，并稀释至100ml，精密量取1.0ml，用水稀释至100ml,精密量取1.0ml，用水稀释至10ml。 空白溶液：按照溶剂溶液的配制方法配制空白溶液，但是没有二氯甲烷和三氯甲烷。 供试液：精密量取5.0ml 样品溶液+1.0ml空白溶液于20ml顶空瓶中；（三样） 对照液A：精密量取5.0ml样品溶液+1.0ml溶剂溶液于20ml顶空瓶中；（三样） 对照液B：精密量取5.0ml DMSO +1.0ml空白溶液于20ml顶空瓶中. 2.2.4 色谱条件 色谱柱：DB624， 30m×0.32mm×1.8um 载气：氮气； 流速：35cm/s ； 顶空温度：样品瓶温105℃；定量环温110℃；传输线温110℃； 进样条件：加热平衡45min，样品瓶加压0.5min，定量环充样0.03min，定量环平衡0.2min，进样1.0min； 炉温：40℃保持15min，以20℃/min的速度升温至240℃，保持2min； 检测器：ECD，温度250℃，进样口温度140℃。 操作 —进样对照液B； —进样对照液A； —进样供试液。 2.2.5 系统适应性 对照液A三针的RSD不大于10% 2.2.6 计算 其中：AT为供试液平均峰面积； AR 为对照液平均峰面积； MR为对照液二氯甲烷或三氯甲烷的称样量； MT为样品的称样量。 3 验证内容 3.1 试剂及仪器 A．检测用试剂 试剂名称 批号 厂家 等级 DMSO 408168 美国天地公司 HPLC 二氯甲烷国药集团化学试剂有限公司 AR 三氯甲烷 0603092 广东汕头市西陇化工厂 AR B．样品 样品名称 红霉素 / 批号 ERY2-200707001 / C．仪器和设备 仪器名称 型号 数量 校正有效期至 气相色谱仪 6890N 1 2009年5月17日 自动顶空进样器 7694E 1 2009年5月17日 3.2 验证溶液配制 样品溶液配制：取样品约2.5g，精密称定,用DMSO溶解并稀释至250ml。 对照储备液：取二氯甲烷约3.0g，三氯甲烷约0.3g，精密称定，用DMSO溶解并稀释至100ml，精密量取1.0ml， 用水稀释至100ml。 各浓度对照液：分别取对照储备液1.0ml，2.0ml，4.0ml，5.0ml和7.