运用植块法培养脑微血管内皮细胞.PDF

细胞生物学杂志 Chinese Joumal of Cell Biology 2007 , 29: 449-453 运用植块法培养脑微血管内皮细胞 祝慧凤万东1 王建伟2 罗勇1 徐晓玉* (西南大学药学院暨中医药学院，重庆400716 ， 1 重庆医科大学附属第一医院神经内科，重庆400016; 2 重庆医科大学组胚教研室，重庆400016) 摘要 探讨简易可行的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells , BMECs)培养 方法，为研究BMECs 细胞在脑血管疾病中的重要作用提供技术支持。分离出生后 1-7 天内的 SD 乳鼠大脑皮质区，植块法培养BMECs 细胞。用倒直显微镜观察BMECs 细胞的形态以及从皮质块 志 迁出的过程;MTT 比色法检测BMECs 细胞的生长曲线;采用免疫纽化染色检测 VIII 因子相关抗 原和CD34 抗原，以鉴定内皮细胞。结果发现，大脑皮质块植块法培养的大鼠BMECs 细胞主单层 杂 贴壁生长，细胞形态以长梭形、多角形三角形、四边形为主，呈典型的铺路石样征象，经鉴定 为内皮细胞，第二代纯度达95% 以上。提示该方法具有经济、简便、要求条件不高，易于纯化的 学 优点，可作为大鼠BMECs 细胞体外培养的良好模型。 物 关键词 大鼠;脑微血管内皮细胞;植块培养 志 生 杂 DAB 显色试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公 内皮细胞是缺血缺氧性损伤的重要靶标，其结构 胞 学 司。 和功能的改变，在血管性疾病的发生发展过程中具有 细 1.3 试剂自己制 重要作用。特别是在心、脑血管疾病中，内皮细胞物 1% 明胶(用 0.02 mo l/L PBS 液配制)高压蒸汽消 的作用更受到重视。寻求获得可靠、大量的脑微血 生毒后于4.C保存; RPMI1 640 完全培养液主要成分:4 管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells , mmol/L L- 谷氨酷胶、 90 U/ml 肝素纳、 100 U/ml 青 BMECs)的方法，将为建立BMECs离体模型提供良好 胞 霉素、 100 问Iml 链霉素和 3.7