lrrc4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用.pdf

中南大学学报（医学版） 　２００７，３２（３） ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） ３７３ ① ＬＲＲＣ４多抗制备及在构建不同级别 脑胶质瘤差异表达中的应用 李　丹，武明花，陈琼，黄　河，黄　琛，李伟松，李小玲，李桂源 （中南大学肿瘤研究所，长沙４１００７８） ［摘要］　 目的：制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因ＬＲＲＣ４（ｌｅｕｃｉｎｅｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ４）的多克隆抗体， 应用该抗体检测ＬＲＲＣ４表达与脑胶质瘤病理分级的相关性。方法：应用ＤＳＧｅｎｅ１．１软件分析 ＬＲＲＣ４全 长蛋白，避开跨膜结构域，选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列。构建相应的融合表达载体 ｐＧＥＸ４Ｔ ２／２７６ｂｐ，转入 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中ＩＰＴＧ诱导表达。融合蛋白经纯化后免疫新西兰兔，收集并纯化抗血清， 获得兔抗人ＬＲＲＣ４多抗，应用该抗体通过 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹和免疫组织化学检测ＬＲＲＣ４在正常人胚胎各器官 组织中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤中的表达差异。结果：制备了效价高、特异性好的兔抗 人 ＬＲＲＣ４多抗，进一步证实了ＬＲＲＣ４在正常人脑组织中相对特异高表达，在脑胶质瘤中表达下调（２２ 例／３７例）或缺失（１５例／３７例），其表达水平与脑胶质瘤的病理分级相关。结论：兔抗人 ＬＲＲＣ４多抗效 价高、特异性好，应用该抗体检测到 ＬＲＲＣ４的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关，为ＬＲＲＣ４后续的 研究工作奠定了基础。 ［关键词］　 ＬＲＲＣ４；　多克隆抗体；　脑胶质瘤；　病理分级 ［中图分类号］　Ｒ７３３；Ｒ７３９．４　［文献标识码］　Ａ　［文章编号］　１６７２７３４７（２００７）０３０３７３０７ ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉＬＲＲＣ４ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｈｕｍａｎｇｌｉｏｍａｓ ｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｅｓ ＬＩＤａｎ，ＷＵＭｉｎｇｈｕａ，ＣＨＥＮＱｉｏｎｇ，ＨＵＡＮＧＨｅ，ＨＵＡＮＧＣｈｅｎ， ＬＩＷｅｉｓｏｎｇ，ＬＩＸｉａｏｌｉｎｇ，ＬＩＧｕｉｙｕａｎ （ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｐｒｅｐａｒｅａｎｔｉＬＲＲＣ４ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＬＲＲＣ４ａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｅｓｏｆｇｌｉｏｍａｓｉｎｒａｂｂｉｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｐｐｒｏｐｒｉ ａｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈｇｏｏｄｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙａｎｄａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙｗａｓｃｈｏｓｅｎｂｙａｎａｌｙｚｉｎｇｗｉｔｈＤＳＧｅｎｅ １．１ｓｏｆｔｗａｒｅ．ＴｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｎｔｐＧＥＸ４Ｔ２／２７６ｂｐ．Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ ＩＰＴＧｔｏｅｘｐｒｅｓｓＧＳＴ－ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｔｈｅｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｓｉｎｓｏｌｕｂｌｅｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓ． Ｔｈｅｎｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｍｍｕｎｉｚｅｒａｂｂｉｔｓ．Ｏｎｃｅｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆａｎ