中国明对虾血浆蛋白质组双向电泳技术的建立与主要高丰度 - 水产学报.pdf

第３５卷第１期 水　产　学　报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１ ２０１１年１月 　 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＦＩＳＨＥＲＩＥＳＯＦＣＨＩＮＡ Ｊａｎ．，２０１１ 文章编号：１０００－０６１５（２０１１）０１－００５０－０８ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１２３１．２０１１．１６９１８ 中国明对虾血浆蛋白质组双向电泳技术的建立与 主要高丰度蛋白点的质谱鉴定 １，２ １ １ １ １ 王宝杰 ，　刘　梅 ，　蒋克勇 ，　张国范 ，　王　雷 （１．中国科学院海洋研究所，山东 青岛　２６６０７１； ２．中国科学院研究生院，北京　１０００３９） 摘要：中国明对虾的血浆脱盐处理后，通过固相ｐＨ梯度胶条等电聚焦、ＳＤＳＰＡＧＥ垂直电泳 对蛋白质进行分离，对不同ｐＨ范围ＩＰＧ胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化，并分别利用硝 酸银和胶体考染方法进行染色，应用ＰＤＱｕｅｓｔ软件对图谱进行了初步分析，采用基质辅助激光 解析电离－飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示，中国明对虾 血浆在ｐＨ４～７范围、１８ｃｍ的２ＤＥ胶上得到了很好的分离，上样量为１５０ ｇ左右，采用银 μ 染可以获得较好的分析胶图谱；而上样１０００ ｇ左右，采用胶体考染方法能获得较好的制备 μ 胶图谱；通过ＭＡＬＤＩＴＯＦ／ＴＯＦＭＳ鉴定的１１个最主要的高丰度蛋白点都是血蓝蛋白。建立 并优化了中国明对虾血浆蛋白质组学的双向电泳技术体系，为进一步开展对虾等甲壳动物的 血浆蛋白质组学研究奠定了基础。 关键词：中国明对虾；血浆；双向电泳；蛋白质组学；血蓝蛋白 中图分类号：ＴＱ３７；Ｓ９１７　　　　　　　文献标识码：Ａ 　　随着后基因组时代的到来，蛋白质组研究越 双向电泳技术（２ＤＥ）是蛋白质组学研究的 来越受到国内外科学工作者的密切关注，蛋白质 首要条件和关键技术。本研究通过对中国明对虾 组学技术在无脊椎动物的研究中得到了广泛的应 血浆样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析， 用［１－３］。蛋白质组学理论和技术的发展也为海洋 建立了一种适合于有效分离对虾血浆蛋白质的双 无脊椎动物带来了新的思维方式和研究方向。目 向凝胶电泳技术方案，得到了比较理想的双向凝 前，蛋白质组学技术在甲壳动物中的应用仍处于 胶电泳图谱，并对主要的高丰度蛋白点进行了串 ［４］ 初步发展阶段，秦兆宇等 初步建立了中国明对 联质谱鉴定，建立了一套完整的血浆蛋白质组分 虾（Ｆｅｎｎｅｒｏｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）肝胰腺蛋白双向电 析技术平台，为今后中国明对虾血浆蛋白质组工 泳技术并探索了白斑综合症中国明对虾肝胰腺差 作的开展提供了技术支持和保障。 ［５］ 异蛋白质组学研究。ＷＡＮＧ等 利用双向电泳 １　材料与方法 技术分别对凡纳滨对虾 ＳＰＦ组与ＷＳＳＶ感染组 的胃组织细胞的蛋白进行了分离，并采用 ＬＣ １．１　主要仪器与试剂 ｎａｎｏＥＳＩＭＳ／ＭＳ技术对筛选出来的差异蛋白质 高速冷冻离心机（德国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司）； ［６］ 进行了鉴定。黄冰心等 提取中国明对虾的血 ＰｏｗｅｒＷａｖｅＸＳ微孔板酶标仪（美国Ｂｉ