elisa高通量筛选pim靶向抑制剂的研究.pdf

中国癌症杂志 2013年第23卷第4期 《 》 260 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.4 ELISA高通量筛选PIM靶向抑制剂 的研究 1 2 2 1 1 1 尚琨 　张鹏 　周璐 　王 　曹越 　李影奕 瑧 1. 复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 ； 2. 复旦大学药学院，上海 201203 　　［摘要］　背景与目的：Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因，包括Pim-1、Pim-2、Pim- 3。研究发现，Pim能够抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量 筛选体系，对Pim抑制剂进行筛选，为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法：通过 计算机辅助药物设计的手段，以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物；利用Pim重组蛋白和 Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制；利用ELISA方法，通过Pim激酶 磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应，建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果：0.01 mmol/L的IPTG 在37 ℃条件下，诱导Bad蛋白2 h，可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白；0.02%的阿拉伯糖在37 ℃条件下， 诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h，可以获得最大量的Pim重组蛋白；ELISA结果显示，Pim激酶与Bad底物之间 的作用存在剂量依赖性反应关系，进而成功建立药物筛选体系；初步筛选出低分子化合物T-18，在体外能有效 抑制Pim激酶活性。结论：利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法，是一种经济、简单、快速、高效、敏感的 筛选手段，并初步筛选出小分子化合物T-18，能够抑制Pim激酶活性，阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过 程，进而抑制肿瘤的发生。 　　［关键词］　Bad；Pim；ELISA,；药物筛选；Pim靶向抑制剂 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.004 　　中图分类号：R73-34　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2013)04-0260-07 Screening of Pim kinase inhibitors by the establishment of high-throughput ELISA system SHANG 1 2 2 1 1 1 Kun , ZHANG Peng , ZHOU Lu , WANG Zhen , CAO Yue , LI Ying-yi (1.Cancer Research Laboratory, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 2.School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 201203, Ch