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重组谷氨酰胺转胺酶的表达、复性及纯化 - 华中农业大学学报
第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报
32 1 Vol.32 No.1
年 月 ,
2013 1 JournalofHuazhon A riculturalUniversit Jan.201314~18
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、
重组谷氨酰胺转胺酶的表达 复性及纯化
邵坤彦 彭宝玉 叶 程 刘 威 何冬兰
,
中南民族大学生命科学学院 武汉 430074
, ,
摘要 以吸水链霉菌基因组 为模板 通过 扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因片段 构建
DNA PCR pGEX-
, / 。 ,
TGase重组质粒 并转化到大肠杆菌中得到重组菌 BL21 GEX-TGase 重组菌经乳糖诱导产生融合蛋白 并对
p
。 , ,
诱导条件进行了优化 表达产物主要以包涵体形式存在 采取稀释及尿素梯度液相色谱结合的方法 成功地实
。 , / 。
现了包涵体蛋白的复性 通过 GST亲和柱纯化目的蛋白 得到酶活为 29U mg的电泳纯目的蛋白
; ; ; ;
关键词 谷氨酰胺转胺酶 乳糖诱导 包涵体蛋白 纯化 复性
中图分类号 文献标识码 文章编号 ( )
Q556 A 1000-2421201301-0014-05
( , ) , ,
谷氨酰胺转胺酶 translutaminaseTGase是 成本 本研究选择乳糖作为诱导剂 以吸水链霉菌
g
, ,
一类催化酰基转移的酶 它主要通过识别蛋白 末 基因组 为模板 通过 扩增得到谷氨酰胺
C DNA PCR
( ), , ,
端氨基酸序列 GGGSLLQG 使蛋白质中的谷氨 转胺酶基因片段 构建 pGEX-TGase重组质粒 并
, , 转化 到 大肠 杆 菌 中得 到重 组 菌 /
酰胺与赖氨酸形成共价键
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