lrrc4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用 - open .pdf

( ) 中南大学学报 医学版 　2007 , 32 ( 3) ( ) J Cen t S ou th Un iv M ed S ci 373 ① LRR C4 多抗制备及在构建不同级别 脑胶质瘤差异表达中的应用 李 　丹 , 武 明花 , 陈琼 , 黄 　河 , 黄 　琛 , 李伟松 , 李小玲 , 李桂源 ( 中南大学肿瘤研究所 , 长沙 4 10 0 7 8 ) [摘要 ] 　目的 : 制备兔抗脑瘤候选抑瘤基 因 LRR C 4 ( leucine rich rep eats con tain ing 4 ) 的多克 隆抗体 , 应用该抗体检测 LRR C 4 表达与脑胶质瘤病理分级 的相关性 。方法 : 应用 D S Gene 1. 1 软件分析 LRR C 4 全 长蛋 白 , 避开跨膜结构域 , 选取亲水性及抗 原性均好 的蛋 白序 列 。构建相应 的融合表达载体 p GEX 4 T 2 / 2 7 6 bp , 转入 E. coli JM 10 9 中 IPTG 诱导表达 。融合蛋 白经纯化后免疫新西兰兔 , 收集并纯化抗血清 , 获得兔抗人 LRR C 4 多抗 , 应用该抗体通过 W e stern 印迹和免疫组织化学检测 LRR C 4 在正常人胚胎各器官 组织 中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤 中的表达差异 。结果 : 制备 了效价高 、特异性好 的兔抗 人 LRR C 4 多抗 , 进 一步证实 了 LRR C 4 在 正常人脑组织 中相对特异高表达 , 在脑胶质瘤 中表达 下调 ( 2 2 ) ( ) 例 / 3 7 例 或缺失 15 例 / 3 7 例 , 其表达水平与脑胶质瘤 的病理分级相关 。结论 : 兔抗人 LRR C 4 多抗效 价高 、特异性好 , 应用该抗体检测到 LRR C 4 的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关 , 为 LRR C 4 后续 的 研究工作奠定 了基础 。 [关键词 ] 　 LRR C 4 ; 　多克隆抗体 ; 　脑胶质瘤 ; 　病理分级 [ 中图分类号 ] 　R733; R739. 4　 [文献标识码 ] 　A 　 [文章编号 ] 　 16 7 2 7 3 4 7 ( 2 0 0 7 ) 0 3 0 3 7 3 0 7 Prepara tion of an tiL RRC 4 polyclona l an tibody and its applica tion in con structing expression prof ile of hum an gliom a s w ith d ifferen t pa tholog ica l grades