三叶因子bm-tff2 突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性.pdf

动 物 学 研 究 2011，Aug. 32(4): 379−385 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DOI ：10.3724/SP.J.1141.2011.04379 三叶因子 Bm-TFF2 突变体在原核体系中的 表达及促细胞迁移活性 1,2,# 1,3,# 4 1 1 1 1,* 余果宇 , 向 阳 , 张红芸 , 江 萍 , 李文辉 , 张 云 , 张 勇 (1. 中国科学院昆明动物研究所 动物模型与人类疾病机理重点实验室, 云南 昆明 650223; 2. 昆明医学院 生物化学教研室, 云南 昆明 650500; 3. 中国科学院研究生院, 北京 100049; 4. 昆明医学院 第一附属医院妇产科, 云南 昆明 650032) 摘要：大蹼铃蟾三叶因子Bm-TFF2 具有较人TFF2 更强的促细胞迁移和抗凋亡活性。该研究利用RT-PCR 方 法扩增得到野生型Bm-TFF2 的基因, 然后分别构建N 端、C 端和分子中两个精氨酸突变的突变体, 最后连接表达 载体产生pET32a(+) ／Bm-TFF2 突变型重组质粒, 转入大肠杆菌中, 经37 °C 培养, IPTG 诱导, 其融合蛋白主要存 在于包涵体中, 用组氨酸标签的亲合柱纯化溶解后的包涵体上清, 进一步用 RP-HPLC 纯化得到硫氧还蛋白 (TRX)/Bm-TFF2 突变型融合蛋白。通过SDS和Western blotting 检测分析其纯度和特异性。最终, 从1L 培 养基中得到20 mg 纯度为95% 的三种重组突变型融合蛋白。三种突变型重组蛋白都具有剂量依赖性的促细胞迁移 活性, 并且其活性无显著差异。该研究为进一步研究Bm-TFF2 结构和功能的关系以及揭示其作用的分子机制奠定 了基础。 关键词：Bm-TFF2; 突变体; 表达; 纯化; 细胞迁移 中图分类号：Q786; Q959.53 文献标志码：A 文章编号：0254-5853-(2011)04-0379-07 Expression of Bm-TFF2 mutants in Escherichia coli and their cell migration-promoting activity 1,2,# 1,3,# 4 1 YU Guo-Yu , XIANG Yang , ZHANG Hong-Yun , JIANG Ping , 1 1 1,* LEE Wen-Hui , ZHANG Yun , ZHANG Yong (1. Key