茚三酮反应法测定蛋白质.ppt

* 题目： 风味蛋白酶水解和提取 椰子蛋白的新方法的探究 指导老师：陈文利 组员：冯旭宏 冯应颖 林锦庞 背景 传统工艺是：脱脂椰奶—— 加热—— 调节其ｐＨ到等电点—— 离心分离——弃清——冷凝干燥——粗蛋白质产品。 椰子营养价值高，椰子蛋白质资源是尚有待开 发的潜力型资源。 目的： 1.为提高椰子的利用率，针对传统提取椰子蛋白的不足，对实验进行改进 。 2.利用所学知识测定蛋白质含量及椰子蛋白的提取，做到学以致用。 方法： 1.捣碎椰子--充分研磨 2.超声波破碎细胞 3.风味蛋白酶水解椰子蛋白质 4.水合茚三酮反应法测定椰子蛋白含量 5.测定等电点以沉淀蛋白质--重新得到椰子蛋白质 充分提取蛋白 优于对比其他 1.提取阶段： 称50g椰肉——捣碎——研 磨（加150ml水）——超声 波处理充分破碎细胞1小时 实验结果 均分为四份各加0mg、100mg、 200mg、300mg风味蛋白酶 6000r/min离心处理 含蛋白清夜 渣 油 1.提取阶段： 测量阶段： （一）1.绘制标准曲线（加酶后） 茚三酮反应法测定蛋白质的含量 ，在570nm处测定它的A值 测量阶段： 2. 样品测量 加0mg、100mg、200mg、300mg风味蛋白酶后，稀释30倍测得椰子蛋白清夜的A值： A1=0.226 A2=0.340 A3=0.601 A4=0.608 测量阶段： 0.732 0.606 0.501 0.423 0.214 0 A570 0.6 0.525 0.475 0.4 0.2 0 蛋白质浓度/(mg/ml) 在沸水浴中加热15min 4 4 4 4 4 4 水合茚三酮溶液/滴 加完后，在50℃下浸提2小时（具体时间根据预实验确定） 1.6 1.9 2.1 2.4 3.2 4 蒸馏水/mL 2.4 2.1 1.9 1.6 0.8 0 标准蛋白质溶液/mL 6 5 4 3 2 1 试剂 试管号 （二）经过多次稀释后，再绘制标准曲线（加酶10mg）。 测量阶段： （二）经过多次稀释后，再绘制标准曲线（加酶）。 A值 蛋白质浓度（mg/ml） 测量阶段： 样品测量： 加250mg风味蛋白酶后，稀释30倍测得椰子蛋白清夜的A值： A=0.499 根据标准曲线计算出50g椰肉中的含量 =[（0.499-0.0205）/0.8388] ×30 ×150 ≈2.572g 纯化阶段： 分别设置pH梯度为3、3.5、4、4.5，过滤后收集沉淀，分别用蒸馏水洗涤沉淀3-5 次，调节pH，5000r/min 离心20min ，干燥后得到椰子蛋白质并称量 。 1.加热处理 2.亚硝酸钠盐稀 问题：怎样使氨基酸和多肽尽可能多的沉淀下来 *