蛋白质质谱.pdf

蛋白质质谱 一．概述 • 蛋白质组学中的质谱鉴定，是使用生物质谱技术对特异 性酶解的多肽分子进行分析，从而得到对应的序列信息 • 质谱分析分成两种 – 多肽分子的质量电荷比的测量( fullscan 和PMF) – 多肽分子的碎片分子的质量电荷比测量(MS/MS质谱 图谱） 生物质谱原理 基本原理： 将样品分子离子化后，根据不同离子间质荷比(m/z) 的差异 来分析蛋白质和多肽的分子量和对蛋白质进行鉴定, 定量及 其修饰点分析。一台质谱仪一般有进样装置，离子化源， 质量分析器，离子检测器和数据分析系统组成。 串联质谱 数据处 离子源 质量分析器 质量分析器 检测器 理系统 质量选择器 Tandem in Space Tandam in Time • QQQ • Ion Trap (2D, 3D) • Q-Trap • FTICR • Q-TOF • Trap-FT • IT-TOF • TOF-TOF 生物质谱分类 进样系统 不连续进样：适用于固体 连续进样：分析样品连续进入 或高沸点液体 GC/MS,LC/MS MALDI 离子化方式 热稳定化合物 热不稳定化合物 电子离子化（EI） 快原子轰击离子化（FAB） 化学离子化（CI） 基质辅助激光解析离子化（MALDI） 质量分析器 电喷雾离子化（ESI） 双聚焦分 四级杆质 离子阱 傅立叶回旋共振 飞行时间 析器 量过滤器 (Ion Trap）（FT-ICR） （TOF） 二．蛋白质质谱鉴定的常规流程 • 蛋白质胶内酶解 • 质谱分析 • 数据库查询 • 生物信息学分析（可选） 蛋白质点的胶内酶解 • 凝胶的脱色 – 考染 – 质谱兼容的银染 • 凝胶点的缓冲液转化 • 加入胰蛋白酶 • 抽提多肽分子 三．质谱分析 • MALDI-TOF 分析（PMF） • MALDI-TOF/TOF 分析 • LTQ 分析 • 其他质谱分析（Q-TOF 等） MALDI-TOF 和MALDI-TOF/TOF 分析 基本原理 • MALDI-TOF/TOF （Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱） 仪器主要由两部分组成：基质附助激光解吸电离离子源（MALDI）和 飞行时间质量分析器（TOF）。 • MALDI 的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激 光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生