血清多肽组及其个体差异的纳升液相色谱鄄高分辨串联质谱分析.pdf

第45卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第1期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2017年1月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 133~138 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160309 血清多肽组及其个体差异的纳升液相色谱鄄 高分辨串联质谱分析 1 2 2 2 2 3 孔祥怡摇 石锴摇 丛乐乐摇 王 静摇 蒋立军摇 洪晓愉 3 3 *2 李水明摇 王 勇摇 赵 晴 1 2 (吉林大学白求恩医学部临床医学院,长春 130021)摇 摇 (吉林大学中日联谊医院神经内科,长春 130033) 3(深圳大学生命与海洋科学学院,深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室,深圳518060) 摘摇 要摇 分析和比较疾病组及健康对照组的混合样品是血清多肽组生物标记物研究的常用方法,但对健康 个体多肽组的差异和共性关注较少。 本研究利用纳升液相色谱鄄高分辨四级杆飞行时间质谱鉴定健康人混合 血清样品(20例)的多肽组,阐明血清多肽组的分子量分布等一般特征,进而选取6例个体样品单独分析并与 混合样品的分析结果进行比较,说明正常健康样品之间的个体差异和共同成分。 结果表明,可鉴定序列的血 清多肽组的分子量范围在7000 Da 以下,纤维蛋白原琢链等蛋白质所属肽段的检出频率最高,肽段在蛋白质 水平上分布具有不均一性,排在前10%的蛋白质占据了约50%的总肽段,而后40%的蛋白质只有1条检出肽 段。 此外,在所有样品中都检测到了来自于8个蛋白质的12个共同肽段,检测到了N端乙酰化、氨基酸氧化、 磷酸化、脱氨化和脱水等翻译后修饰和明显的阶梯序列现象。 本研究在肽段序列水平分析了血清多肽组的基 本特征和个体差异,可为血清多肽组生物标志物研究提供参考。 关键词摇 多肽组;高分辨飞行时间质谱;血清;个体差异 1摇 引言 生物体内的内源性多肽为蛋白质降解的产物,反映了蛋白质的降解过程,有些多肽还具有抗菌抗炎 [1] 和信号传导等作用 。 多肽组学的概念最早出现于2001年,是指生物样品中的全部肽段,生物标记物 [2] 和神经活性肽研究是多肽组学的两个最主要应用 。 生物标记物的一个主要来源是血液,随着蛋白质 组学技术的完善和拓展,血清多肽组已成为基于质谱的血液生物标记物研究的重要方法。 基质辅助激光解吸电离鄄飞行时间质谱(MALDI鄄TOF)和纳升液相色谱鄄电喷雾串联质谱是进行多肽 组研究的两种常用技术,但它们取得的多肽组数据及应用模式不同。 MALDI鄄TOF方法检测的是肽段分 子量,在多肽组中也称为谱图轮廓(Spectra profile)[3~5]。 利用MALDI鄄TOF方法筛选生物标记物首先需 [6,7] 要在疾病组与对照组中找到相同分子量的质谱峰,然后比较它们离子强度的差异 ,本方法的优势在 于简单、直观、质量检测范围较宽,并且MALDI源与傅里叶变换离子回旋共振质谱或串联飞行时间质谱 [8,9] (TOF/ TOF)联用也可以获得序列信息