大肠杆菌转形实验escherichia coli (e coli) transformation.pdf

2015/6/10 • 6月16日各小組報告： 1, 3, 6 組果蠅雜交實驗簡報 2, 4, 5 組研究報告呈現 （每組報告時間10分鐘） • 影片欣賞 • 複習小考 大腸桿菌轉形實驗 Escherichia coli (E. coli) transformation 將外源性DNA送到生物體，並且導致細胞表 現型（phenotype ）改變之過程稱為轉形作用 1 2015/6/10 步驟一 各組將 兩管處理過的大腸桿菌（勝任細胞） 分別加入兩管DNA中 放置冰上30 分鐘 實驗目的： 將DNA送入 大腸桿菌 大腸桿菌(勝任細胞) 雙股環狀 DNA (質體 DNA, plasmid) 改變大腸桿菌的遺傳性徵 2 2015/6/10 Plasmids質體  Plasmids occur naturally in many strains of bacteria and a few eukaryotic cells such as yeast 在細菌當中，除了基因體 DNA外，還有其他 DNA存在  Range in size from a few thousand to 500,000 bp  Carry from one to hundreds of genes帶有許多基因！  Different plasmids will have one to 100 copies per cell  Have their own origins of replication which are strong or weak  Plasmids can provide a growth advantage to the cell  Some plasmids can integrate into the chromosome  Called episomes  質體有自己的複製起始點，可以自行複製  其基因之表現可協助寄主在困境中生長 Plasmid Map 乳糖操縱子基因 抗藥性基因 複製起始點 3 2015/6/10 改變大腸桿菌的遺傳性徵 當質體上帶有抵抗 抗生素作用的基因時，經轉 形後的大腸桿菌，即可抵抗抗生素抑制，而生 長在條件培養基上 成功生長 大腸桿菌(勝任細胞) 含抗生培養基 雙股環狀 DNA (質體 DNA, plasmid) 死亡 含抗生培養基 如何將質體送入大腸桿菌？  大腸桿菌細胞經由氯化鈣的處理，破壞細胞壁 利用熱休克 (heat shock) ，使質體DNA 進