3 mae法提取石蒜生物碱的机理 - 中山大学化学与化学工程学院.ppt

* * 微波辅助提取石蒜生物碱的热力学机理研究 答辩人：林广欣 指导老师：李攻科教授 中山大学化学与化学工程学院 二零零五年五月 前言 结果与讨论 实验部分 结论 致谢 一、前言 1. MAE的原理、特点及其应用 离子传导机理和偶极子转动机理。 具有加热均匀、快速、有选择性和生物效应等特点。 在环境样品预处理和植物有效成分提取方面应用较广。 2. MAE和溶剂回流提取（SRE)的比较 SRE: 费时，溶剂消耗量大，提取效率 低，易造成环境污染。 MAE: 快速，溶剂用量小，提取效率高， 节能，环境友好。 3. MAE法提取植物有效成分的机理研究进展 Pare 等提出细胞破壁假设，郝金玉等持反对意见 。 李核、李攻科、张展霞等人提出MAE的动力学模型。 热力学机理尚没见文献报道。 4. 石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏的药理作用 石蒜碱：有效抑制癌细胞； 力可拉敏：有效治疗小儿麻痹后遗症； 加兰他敏：有效治疗早期老年痴呆症。 主要研究内容 1. MAE法提取石蒜生物碱过程的热力学函数测定。 3. MAE法提取石蒜生物碱的机理。 2. MAE法提取石蒜生物碱过程的影响因素。 创新点 率先系统地探讨MAE技术提取石蒜生物碱过程的各种影响因素； 首次研究MAE提取植物有效成分的热力学机理，并且用电子显微镜证明了其合理性。 二、实验部分 1. 仪器和试剂 Mars-Ⅹ型微波提取系统（CEM，USA）， XL-30型扫描电镜（PHILIPS公司） ，pHS-3C型酸度计（上海伟业仪器厂） ；SHIMADZU LC-2010C高效液相色谱仪（带自动进样器），CLASS-VP 6.12 SP4工作站（Shimadzu，JAPAN） 。 石蒜碱、加兰他敏和力可拉敏标准样品； 三乙胺水溶液（pH=9.00）：取3.5 mL三乙胺于500 mL 水中，用醋酸调节至pH为9.00； 三乙胺、乙腈、95%乙醇、无水甲醇、氯仿、2%HCl、氨水。 石蒜样品为广东天普药业有限公司提供的石蒜干料。 2. 样品溶液的制备与测定 2 .0g石蒜，30 mL 95％乙醇 MAE提取或SRE提取 过滤 滤液用氯仿萃取三次，取水层 加氨水至水 层pH＝10.0 旋干 用氯仿萃取三次，取氯仿层 旋干 甲醇定容 HPLC测定 图1 样品制备与测定流程图 3. 色谱条件 色谱柱：250?4.60mm Luna 5? C18(2) 100A 流动相：15%三乙胺水溶液（A）：乙腈（B）：甲醇（C）；流速：1 mL/min；进样量：10 ?L；检测波长：232 nm和289 nm双波长检测 梯度洗脱程序：0～20 min，VA/VB：85/15～ 80/20；20～40min，VA/VB/VC：80/20/0～ 70/15/15；40～50 min，VB：100。 4. 微波提取热力学计算 lnK ＝ －△Hθ / RT + C (常数) （1） △Gθ ＝ －RTlnK （2） △Sθ ＝ （－△Hθ－△Gθ）/ T （3） 测定不同温度下的提取平衡常数K，根据以上3式，通过作图可求得提取自由能变△Gθ ，提取焓变 Δ △Hθ 和提取熵变△Sθ 。 针对所研究的石蒜生物碱提取体系，定义提取平衡常数K为体系达到平衡后提取液溶质的量和细胞中溶质的量之比。 三、结果与讨论 1. HPLC测定 A ：Lycorine、Lycoramine和Galantamine混合标准溶液（100 mg/L）； B：石蒜生物碱提取液。 图2 HPLC 图 0.000 2.46 2.58 未检出 7.50 19.6 5 0.000 0.000 0.000 未检出 未检出 未检出 6 0.000 2.60 5.20 未检出 9.94 39.5 4 9.65 5.42 7.44 6.28 18.7 56.5 3 19.4 15.5 13.4 12.6 53.7 102 2 71.0 74.0 71.4 46.2 256 542.0 1 加兰他敏 力可拉敏 石蒜碱 加兰他敏 力可拉敏 石蒜碱 提取率（%） 测定结果（mg/L） 提取次数 2.MAE法和SRE法提取石蒜生物碱的热力学函数计算 表1 微波辅助提取石蒜生物碱提取率测定结果 1—Lycorine；2—Lycoramine；3—Galantamine； A：MAE法 B：SRE法 图3 石蒜碱，力可拉敏