番鸭细小病毒型“白点病”PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

· 18 ·试验研究 东畜牧兽医科技 2008年(第33卷)第6期 番鸭细小病毒型 “白点病PCR检测方法 的建立与初步应用 张 伟 ，季艳菊 ，陈芳艳。，廖 明 ，王林川 1,3 (1．华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2．华南农业大学动物科技学院，广东 广州 510642；3．广东大华农动物保健品有限公司，广东 新兴 527400) 摘 要：番鸭细小病毒型 自‘点病”主要侵害三周龄以内的雏番鸭。番鸭细小病毒型 白‘‘点病”通常与番 鸭小鹅瘟以及番鸭 三‘周病”混合感染，且番鸭小鹅瘟与番鸭 三‘周病”一临床症状和病理变化相似，因此给 临床诊断带来了困难，甚至造成误诊 针对这种情况，本文在细小病毒的保守区域设计了一对细小病毒通用引 物P1、P2：在番鸭 三‘周病”病毒的特异性区域设计了一对特异性引物Ml、M2；在番鸭小鹅瘟病毒的特异性 区域设计了一对特异性引物G1、G2。利用所设计的三对引物进行PCR检测，能够快速、准确地诊断出雏番鸭 细小病毒型 自‘点病”，以及与番鸭小鹅瘟或者番鸭 三‘周病”的混合感染。 关键词：番鸭细小病毒型 自‘点病”病毒；番鸭三周病病毒；番鸭小鹅瘟病毒；聚合酶链反应；诊断 中图分类号：8858．32 文献标识码 ：A 文章编号：1005—8567(2008)06—0018—06 番鸭细小病毒型 “白点病”，又叫番鸭 “肝 白 准确、快速地确诊番鸭是单独感染番鸭细小病毒 点病”、“花肝病 ”、“白点病”。本病以肝、脾出现 型 “白点病”还是与番鸭小鹅瘟或者番鸭 “三周 白色坏死点为主要临床病变，并且主要侵害三周 病 ”混合感染。 龄以内的雏番鸭。该病 的发病率为 30％~90％，死 1 材料与方法 亡率为 60％~80％。发病 日龄越早，病情越严重。 1．1 材料 MPV(番鸭 “三周病”病毒)：分离于 1950年 Kaschula等在南非首次报道了该病 的发 广东三水某养鸭场病死鸭；GPV (番鸭小鹅瘟病 生；1972年，法国学者Gaudry等在国际上首次从 毒)：由华南农业大学禽病学教研室保存：MDWNV 患病番鸭中分离到了呼肠孤病毒。 目前该病广泛 (番鸭细小病毒型 “白点病”病毒)：由华南农业 流行于法国、以色列、德国、意大利等国[】]，1997 大学传染病学教研室禽病组保存。呼肠孤病毒、鸭 年，该病在我 国首次出现。由于该病具有较高的发 瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒：由华南农业大学传染 病率和死亡率，因此引起了国内外的关注 。目前国 病学教研室禽病组保存。 内外不少学者对该病病原进行了研究，得出多种 1．2 方法 结果，有些学者怀疑该病的病原是细菌、细小病毒 1_2_1 引物的设计与合成 根据网上已发表的番 变异株、鸭病毒性肝炎弱毒株等，还有些学者从中 鸭 “三周病”病毒的ns、vpl基因序列以及番鸭小 分离到了呼肠孤病毒、疱疹病毒、细小病毒等。 鹅瘟病毒的ns、vpl基因序列，同时结合华南农业 2003年，华南农业大学传染病学教研室禽病组在 大学传染病学教研室禽病组所分离到的番鸭细小 国内外首次确认番鸭细小病毒型 “白点病 ”可由 病毒型 “白点病”病毒的ns、vpl基因序列，由计算 细小病毒单独引起 。 机辅助，应用软件 DNASTAR5．07找到了细小病毒 但研究发现：番鸭细小病毒型 “白点病”病原 科编码基因的保守序列，以及番鸭 “三周病”和番 属于新型的番鸭细小病毒，直径 25～30nm、圆 鸭小鹅瘟的特异性序列。在MPV、GPV以及番鸭细小 形。另外，该病常与番鸭小鹅瘟或番鸭 “三周病” 病毒型