nodal蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备.pdf

第 １９卷第６期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．６ 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１０年１２月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ｄｅｃ．２０１０ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１０．０６．０１７ Ｎｏｄａｌ蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备   宋怀婷，梁　洁，莫小阳，邓　云，万永奇，李永青，袁婺洲，江志钢，吴秀山 ，王跃群 （湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙４１００８１） 摘　要： 斑马鱼心脏发育模型中Ｎｏｄａｌ编码转录因子调节心脏的左右不对称发育，为了进一步研究 Ｎｏｄａｌ信号 途径在心脏发育中的调控作用和心脏疾病发生的分子机制，需要获得斑马鱼Ｎｏｄａｌ蛋白并制备其抗体。采用从 斑马鱼心脏组织中提取ＲＮＡ，通过反转录得到心脏组织各种表达基因的ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增得到Ｎｏｄａｌ部 分编码区序列，然后将其连接到ｐＥＴ２８ａ载体上获得原核表达。经酶切及测序鉴定后，转化 Ｒｏｓｓｅｔａ细菌，并用 ＩＰＴＧ诱导表达融合蛋白，ＮｉＩＤＡ凝胶柱亲和纯化，将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并用 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测抗体。获得了Ｎｏｄａｌ原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗 Ｎｏｄａｌ多克隆抗体，为 Ｎｏｄａｌ功能的进一步研究奠定了基础。 关键词： Ｎｏｄａｌ；融合蛋白；多克隆抗体 中图分类号： Ｑ７８ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１０）０５０８１３０４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｏｄａｌＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎａｎｄ ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＩｔｓＰｏｌｙｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ ＳＯＮＧＨｕａｉｔｉｎｇ，ＬＩＡＮＧＪｉｅ，ＭＯＸｉａｏｙａｎｇ，ＤＥＮＧＹｕｎ，ＷＡＮＹｏｎｇｑｉ，ＬＩＹｏｎｇｑｉｎｇ，   ＹＵＡＮＷｕｚｈｏｕ，ＪＩＡＮＧＺｈｉｇａｎｇ，ＷＵＸｉｕｓｈａｎ ，ＷＡＮＧＹｕｅｑｕｎ （ＴｈｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＨｅａｒｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＫｅｙＬａｂｏｆＭＯＥｆｏｒＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ， ＨｕｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００８１，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＩｎＺｅｂｒａｆｉｓｈｈｅａｒｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｍｏｄｅｌ，Ｎｏｄａｌｅｎｃｏｄｅｓａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｗｈｉｃｈｃａｎｒｅｇｕｌａｔｅｌｅｆｔｒｉｇｈｔａｘ ｉｓａｓｙｍｍｅｔｒｙｏｆｈｅａｒｔ．ＴｈｅｏｂｊｅｃｔｏｆｏｂｔａｉｎｉｎｇｔｈｅＺｅｂｒａｆｉｓｈＮｏｄａｌｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔ’ｓａｎｔｉｂｏｄｙｉｓｔｏｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ Ｎｏｄａｌｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈｅａｒｔａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ．ＵｓｉｎｇｃＤＮＡｏｆｔｈｅｇｅｎｅｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎ ｈｅａｒｔｔｉｓｓｕｅｓｗｈｉｃｈａｒｅｇｏｔｔｅｎｂｙｒｅｓｅｒｖｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ